Virusne infekcije. Dijagnostičke metode

Djeca

Ljudske virusne infekcije

Laboratorijska dijagnostika virusnih infekcija



  • imunosna analiza radioizotopa (RIA),
  • enzimski imunoanaliza (ELISA),
  • imunofluorescentna reakcija (RIF),
  • fiksaciju komplementa (RCC),
  • reakcija pasivne hemaglutinacije (RPHA),
  • inhibicija hemaglutinacije (HGA) i drugi.

Kada se koriste metode serodiagnostike, obavezno je ispitati uparene serume. U ovom slučaju, četverostruki porast titra antitijela u drugom serumu u većini slučajeva služi kao pokazatelj tekuće ili svježe prenosive infekcije. U istraživanju jednog seruma koji se uzima u akutnom stadiju bolesti, detekcija antitijela IgM klase, koja ukazuje na akutnu infekciju, je dijagnostička važnost.

Načela dijagnoze virusnih bolesti

Dijagnoza igra presudnu ulogu u sustavu mjera za suzbijanje virusnih etiologija bolesti životinja.

Brza i pravilno dijagnosticirana dijagnoza osigurava uspjeh u uklanjanju izbijanja, jer vam omogućuje da jasno prepoznate epidemiološku situaciju i poduzmete pravodobne ciljane mjere za poboljšanje stoke životinja s najmanjim gubitkom.

Da biste postavili dijagnozu, morate prikupiti, proučavati, analizirati i usporediti cijeli niz različitih podataka. Stoga je dijagnoza rezultat mukotrpnog i zamišljenog rada.

U prvoj fazi dijagnoze koriste se podaci koji se mogu brzo prikupiti izravno na farmi. To uključuje:

epizootiološki podaci, uključujući informacije o pokrivenosti bolesti u ovoj životinjskoj populaciji, brzini i teritorijalnoj raspodjeli bolesti, vrstama oboljelih životinja, dinamici prepoznavanja pacijenata itd.;

klinički znakovi bolesti. To uključuje određivanje (u odnosu na normalne tjelesne temperature), frekvencija disanja, i oblik puls, poremećaja apetita, ponašanje, stanje kože i sluznica, funkcioniranje probavnog sustava, izolacije i t d.,;

patološke promjene koje su obično instalirani na otvaranju uginulih ili zaklanih životinja. Razlikovati makroskopskih promjena (u usporedbi s normom) oblik, veličinu, boju, konzistenciju, pojavu kvržica, krvarenja, vrećica i drugih subjekata koji se ne nalaze u normalu, kao i mikroskopske promjene u stanicama i tkivima, otkrivene histološkim metodama.

U većini slučajeva, na osnovu tih podataka može izvršiti prethodni dijagnozu, jer mnoge virusne bolesti imaju slične podatke epizootologicheskie, kliničke znakove i patološke promjene (na primjer, virus parainfluence-3 dijareju, infektivni rinotraheitisa, respiratorni sincicijski i adenovirusni infekciju goveda ili bolesti Newcastle i ptičja gripa, itd.).

Osim toga, često se bolest može biti uzrokovan nije jedan ili više nego dva etiološki agensi (na primjer, bakterija ili virusa i dva ili više virusa). Čak i takva bolest, kao što su slinavke i šapa u goveda, možete biti prilično sigurni dijagnoza ehpizootologicheskij, kliničkih i patoloških podataka, međutim, to zahtijeva laboratorijske testove kako bi utvrdili vrstu i verziju patogena.

Unatoč približnoj prirodi preliminarne dijagnoze, ona igra vrlo važnu ulogu, jer usmjerava veterinarske stručnjake da provode relevantne aktivnosti.

Konačna dijagnoza virusne bolesti u većini slučajeva može se provesti samo s rezultatima laboratorijskih testova. U laboratorijskoj dijagnozi virusnih bolesti, točnost dijagnoze prvenstveno ovisi o ispravnosti uzimanja materijala (uzorka) od oboljelih i mrtvih životinja, njegovog transportiranja, kvalitete pripreme i tehnike ispitivanja virusnog materijala.

Materijal za proučavanje treba uzeti što prije nakon pojave jasnih znakova bolesti ili najkasnije 1-2 sata nakon kliničke smrti ili klanja (kasnije počinje bakterijske kolonizacije, a najmanje nastavak iznosu od zaraze virusom može se smanjiti utjecaj zaštitnih mehanizama organizma).

Prilikom uzimanja materijala za izolaciju virusa, treba proći od patogeneze pretpostavljene infekcije (ulazna vrata, načine širenja virusa u tijelu, mjesta prostiranja, kliničkih znakova i načina dodjele). Laboratorij je usmjeren na materijal koji najvjerojatnije sadrži patogene. Moraju se pridržavati sljedećih općih pravila:

materijal treba uzeti strogo aseptično;

materijal treba odmah očuvati (staviti u termos bočicu s rashladnom smjesom ili dodavanjem 50% sterilnog glicerina) kako bi se spriječilo uništavanje virusa;

Materijal je prikladniji za uzimanje sterilnih epruveta s gumenim čepom ili u bočicama pod antibioticima. Dovoljno je 5-10 g materijala za ispitivanje;

ispitne cijevi ne smiju imati prljavu oznaku; materijal se šalje pismom i pismom pokrića, koji označava farma, vrstu bolesnih životinja, preliminarnu dijagnozu, vrstu i količinu patoloških materijala, što treba učiniti, datum i ime liječnika.

Ovisno o simptomima bolesti, a time i lokalizaciji patogena iz bolesne životinje, može se uzeti sljedeći materijal:

ispiranja iz sluznice nosa, oči, iz stražnjeg faringnog zida, rektuma i cloaca u pticama. Uzmite ih sterilnim pamučnim tamponima koji su uronjeni u epruvete ili bočice s 3-5 ml odgovarajuće tekućine (Hanksova otopina, Eagleov medij, 199, itd.) S antibioticima;

sadržaj vezikula, pustula, zidova vezikula, korica na koži; fekalne mase izravno iz rektuma;

krv za izolaciju virusa i krvi za proizvodnju uparenih krvnih seruma za otkrivanje i određivanje titara antitijela. U tu svrhu, krv se uzima dva puta od iste životinje - na početku bolesti i nakon 2-3 tjedna, tj. Na početku i na kraju bolesti.

Od leševa patološki materijal treba uzeti najkasnije 1-2 sata nakon kliničke smrti ili klanja životinje. Kao patološki materijal uzeti dijelove organa koji:

imaju vidljiva odstupanja od norme;

mogu biti pogođeni i sadržavati virus na temelju kliničke slike bolesti;

najčešće sadrže virus: slezenu, jetru, pluća, bubrege, mozak, limfne čvorove.

U laboratoriju se neki materijal uzima za ispitivanje, a ostatak se pohranjuje u hladnjak za dodatne studije. Zatim izrađuju plan za proučavanje poslanog materijala, koji uključuje sljedeće zadatke: otkrivanje virusa u materijalu; izolacija (izolacija) virusa iz materijala; identificiranje izoliranog virusa;

ako je potrebno, potrebno je dokazati etiološku ulogu izoliranog virusa;

Načela i metode dijagnoze virusnih infekcija

Sustav mjera za borbu protiv virusnih infekcija uključuje: dijagnozu liječenja i prevencije.

Dijagnoza igra presudnu ulogu u sustavu mjera za suzbijanje bolesti virusne etiologije

Dijagnoza (od grčke riječi dijagnoza - prepoznavanje) je definicija prirode i suštine bolesti, utvrđivanje uzroka i oblika. Proces dijagnosticiranja naziva se dijagnostika. Sastoji se od tri faze:

Faza 1 - promatranje i proučavanje bolesnih životinja;

Faza 2 - analiza i procjena rezultata istraživanja

Faza 3 - zaključak o uzroku, obliku bolesti i stanju bolesnog organizma.

Brzo i pravilno dijagnosticirano, to je 50% uspjeha u borbi protiv virusne infekcije, to vam omogućava da poduzmete ciljane mjere kako biste ga eliminirali s najmanjim gubitkom. Izbijanje virusne infekcije može se usporediti s požarom. Primjećeno je ranije "gorenje", a ranije je počelo "gašenje", manje štete.

Primjer: Poljoprivredna perad u blizini Lenjingrada 1986. izbila je Newcastlesku bolest. Dijagnoza je provedena tek nakon 2 tjedna i pogrešna (za gripe). Kao rezultat zakašnjelo i netočne dijagnoze, izgubljeno je 3 milijuna ptica. Primjer pokazuje da je u rukama veterinara gospodarstvo zemlje. Stoga bi dijagnoza virusne bolesti trebala biti što je prije moguće i što je točnije moguće.

Ako se sumnja na bilo koju zaraznu bolest, uključujući i dijagnozu virusa, cjelovito se utvrđuje na temelju sljedećih podataka:

1 epizootski podaci

2 podaci o kliničkim ispitivanjima

3 od ovih patohanatomskih ispitivanja

4 laboratorijska podataka

U procesu dijagnosticiranja razlikuju se dvije faze:

Prva je kliničko-epizootska. Ova faza se provodi izravno na mjestu infekcije virusom (u farmi, vrtiću, farmi peradi). Na temelju prikupljenih podataka (epizootski, klinički i patoanatomski) uspostavlja se preliminarna dijagnoza.

Druga je laboratorijska dijagnoza. Obavlja se u specijaliziranoj ustanovi - virološkom laboratoriju ili odjelu. Provedena je studija o materijalu dobivenom iz mjesta podrijetla virusne infekcije i uzimajući u obzir preliminarnu dijagnozu. Na osnovu rezultata laboratorijskih testova utvrđuje se konačna dijagnoza virusne infekcije.

Prva faza započinje prikupljanjem i proučavanjem epidemioloških podataka. To uključuje informacije o prisutnosti virusne infekcije u tom području i što; o broju bolesnih životinja, njihovoj vrsti, dobi, spolu, fiziološkom stanju; sezonski bolesti, prisutnost vektora i spremnika, infekcije životinja kontakt s izvorom zaraze; stopa širenja bolesti; o dolasku novih životinja, životinjskim preuređenjima, cijepljenju i imunitetu. Na primjer, slinavke i šapa karakterizira: uobičajena u graničnom području na granici s problematičnom području ove bolesti javlja se samo još vrhom kopitarima brzo pokrivenost stanovništva u kratkom vremenskom razdoblju, nositelji mogu biti bilo životinje i ptice i ljudi, proizvoda životinjskog podrijetla, itd Klinički pregled bolesnika početi sa životinjskom habitusa (temperatura, puls, disanje, položaj tijela u prostoru, temperament, ustav, debljina itd) i povijesti. Zatim se ispituje svaki sustav tijela primjećujući odstupanje od normalnog stanja.

Patološke promjene se uspostavljaju na otvaranju pali ili prisilno ubijene životinje. Promjene u organima i tkivima zabilježene su u usporedbi s normom, prisutnost neoplazmi.

U nekim slučajevima, klinički i morfološke promjene su tako tipično da je moguće postaviti dijagnozu (boginje, slinavke i šapa). Međutim, često je bolest atipična ili se znakovi bolesti odmah promatraju s nekoliko infekcija. Također je nedavno pronađen mješovite infekcije, kada je bolest uzrokovana ne jedan, nego dva ili više uzročnici (dva virusa ili virusa i bakterija).

Drugi primjer je kada, čak i uz takve infekcije kao FMD laboratorijskim ispitivanjima su dužni odrediti vrstu i podvrstu, jer imunitet štiti samo od vrste FMD virusa koja je formirana.

Stoga, u svim slučajevima, preliminarnu dijagnozu mora biti potvrđena laboratorijskim testovima.

Dakle, kao rezultat kliničke i epidemiološke analize stotina virusnih bolesti veterinara zaustavlja na 2-3 infekcija i pokazuje ih u popratnom dokumentu za biomaterial, koja ih ostavlja u virologiju laboratoriju.

Rezultati laboratorijskih istraživanja uvelike ovise o ispravnosti uzimanja i slanja biomaterijalnog (patološkog) materijala za ove studije.

Osnovni zahtjevi za primanje i prosljeđivanje biomaterijala su sljedeći:

Materijal se uzima na početku kliničke manifestacije virusne bolesti. Budući da se maksimalni sadržaj virusa u tkivima tijela točno promatra tijekom tog perioda infekcije i ostaje na dovoljnoj razini samo nekoliko dana. Nakon sedmog-osmog dana bolesti, a pogotovo ako je životinja umrla da bi izolirala virus iz uzorka, gotovo je nemoguće.

2 Materijal mora biti svjež. To znači da materijal traje najviše 1-2 sata nakon smrti ili prisilnog klanja životinje. Budući da je titar virusa u tkivima nakon smrti životinje brzo smanjen kao rezultat autolize tkiva i reprodukcije mikroorganizama.

3 Pri sterilizaciji biomaterijala primjećuje se sterilnost. Manje onečišćenja materijala od drugih mikroorganizama, lakše je otkriti i izolirati pravi uzročnik infekcije.

4 Pri uzimanju biomaterijala uzeti u obzir tropizam virusa i odabrati one tkiva i organe u kojima se virus reproducira i akumulira u tijelu.

5 Preuzeti materijal, ako je nemoguće odmah isporučiti u laboratorij kako bi se zadržao aktivnost virusa. U tu svrhu, zamrzavanje biomaterijala se najčešće koristi ili očuva ugrađivanjem sterilne otopine glicerina u 50%.

Cijeli red uzorkovanja krmenog materijala, njegovo očuvanje i transport za specifične virusne infekcije reguliran je posebnom uputom iz Veterinarskog zakonodavstva, Vol.2, str. 155.

U virološkom laboratoriju dobivena biomaterijal se uzima i priprema za proučavanje. Zbog toga je tiskan, oslobođen od konzervansa, odvažen i podijeljen u 2-3 dijela (jedan dio materijala pohranjen je do kraja studije). Ako je potrebno, dio je materijala za bakteriološke i mikološke preglede

Uzimajući u obzir sadržaj pratećeg dokumenta, pripremljen je studijski plan za virusne infekcije koje su navedene u njima.

Postoje tri područja laboratorijske dijagnoze virusnih infekcija:

1 Otkrivanje virusa ili tragovi njegove prisutnosti u biomaterijalu korištenjem ekspresnih metoda.

Izolacija virusa iz biomaterijala i njegova identifikacija.

Retrospektivna serološka dijagnoza virusnih infekcija.

Glavni cilj laboratorijskih istraživanja je postizanje brzog i točnog rezultata, pa proučavam biomaterijal barem dvije metode različitih smjerova.

Prva metoda omogućuje vam da što brže odgovorite, a drugi način (pouzdaniji) treba potvrditi rezultat prvog. Ova metoda istraživanja daje povjerenje u ispravnost dobivenih rezultata. I prema ovom rezultatu laboratorijskog istraživanja biomaterijala, izrađena je konačna dijagnoza za virusnu infekciju.

Razmotrimo što su metode uključene u svaki smjer laboratorijske dijagnostike.

Prvi smjer laboratorijske dijagnoze je izričita metoda

1 skupina metoda omogućuje otkrivanje genoma (nukleinskih kiselina) virusa u biomateričkoj. Ovo je metoda DNA probe i lančane reakcije polimeraze (PCR). Najčešće u laboratorijskoj dijagnostici koriste PCR. Trenutno, ova reakcija je najosjetljivija i specifičnija, čime se identificira do jedne molekule nukleinske kiseline virusa u apsolutno bilo kojem materijalu koji se istražuje.

2 skupina metoda omogućuje otkrivanje virusnih antigena u biomateričkoj. Virusi imaju specifične za svaku vrstu proteina u kapsidu, super kapsidu (vanjskim antigenom) i jezgri (unutarnji antigeni). Stoga, nakon što su dijagnostički specifični serumi ili imunoglobulini na određene antigene virusa, moguće je detektirati virus u biomateričkoj serološkim reakcijama. Najosjetljiviji od njih su reakcija imunofluorescencije-RIF (MFA), enzimski imunoanaliza je ELISA, a radioimunska analiza je RIA. Zatvorite osjetljivost RNGA. Manje osjetljive su reakcija difuzijske precipitacije - RDP, reakcija fiksacije komplementa - RBC i druge.

Sve reakcije se temelje na interakciji sa specifičnim antitijelima homolognih virusnih antigena da bi se formirao kompleks antigen-antitijelo. Otkrijte kompleks na mnoge načine. Tako, u RIF od boje luminiscencije su povezani sa specifičnim antitijelima pod fluorescentnim mikroskopom na ELISA djelovanjem enzima vezana na specifična protutijela u RIA za radioaktivnog zračenja izotop vezanog na antitijela u IHA od aglutinacije senzibiliziranih (napunjenih) antitijela eritrocita u DTM od precipitinsku liniju agaroznom gelu, promjena u RSC hemolitička sustav, koji se dodaje u reakcijsku smjesu, i tako dalje.

RIF, IFA i RIA, RNGA su univerzalni, jednostavni u tehnici izvedbe, ne zahtijevaju sterilnost materijala i omogućuju dobivanje rezultata u roku od 2-4 sata.

Potrebno je oko dva dana da RNC i RDD dobiju odgovor, tako da se trenutačno rjeđe koriste. RSK za određivanje vrste virusa slinavke i šapa, RDP u dijagnozi bjesnoće IRT stoke, kuge pasa (čak se može koristiti i truljenje).

4 je detekcija virusnih hemaglutinina u biomateričkoj. Hemaglutini su površinski receptori virusa, pomoću kojih se može adsorbirati na eritrocite i spojiti ih zajedno. Identificirajte takve viruse pomoću reakcije hemaglutinacije (RGA).

Hcmaglutiniranim sojevima virusa aktivnost nije isti onaj drugi ne mogu. hemaglutinacije uvjeti su različiti: pH, temperature (4, 22, 37 ° C), prisutnost Ca iona, natrij magnezij vrste koje eritrocita (spol, dob, tjelesna stanje). Hemaglutinirajuće svojstva u virusi su stabilniji od zarazne, tako da se mogu manifestirati čak i kada se virus ne pokazuje infektivnost. RSA služi za detekciju biološkog materijala na virus gripe, virus parainfluence, virusa IRT. Npr distribucija virusa gripe i virus bolesti u tijelu nyukaslskoy kokoši i pilića su različite. Uz gripe u slezeni jetri i plućima pilića i kokoši uvijek naći puno hemaglutinina 1: 1024, a za Newcastle hemaglutinina bolest otkriti samo 20 jednodnevnih pilića od 1: 128, a kokoši ne. Dakle, ova metoda može razlikovati ove dvije bolesti u roku od 2 sata.

Prisutnost virusnih hemaglutinina često je maskirana prisustvom inhibitora složenog sastava koji dolaze iz stanica tkiva u kojima se virus umnožava. Oni se mogu ukloniti zagrijavanjem, obradom s acetonom, tripsinskim eterom, brzom centrifugiranjem.

Ali često u biomaterijalnoj, koncentracija virusa nije adekvatna i stoga se ova reakcija uglavnom koristi nakon nakupljanja virusa u živom sustavu.

5 skupina metoda omogućuje upotrebu mikroskopije za otkrivanje virusa virusa u biomateričkoj. Prva metoda je virusoskopija - otkrivanje velikih virusa pod svjetlosnim mikroskopom poslije posebnog bojenja, što omogućuje povećanje i kontrasta viriona. VIRUSOSKOPIJA se koristi samo za dijagnozu infekcija velikih boginja, jer se samo svjetlo za mikroskop može vidjeti virus malih boginja.

Virije drugih virusa otkrivene su pod elektronskim mikroskopom. Ova metoda dijagnoze je vrlo skupo jer zahtijeva skupu opremu, osoblje i kompleksnu pripremu materijala za istraživanje. Osim toga, morfologija viriona može odrediti samo svoju obitelj, ali ne i vrstu. Stoga se ova metoda primjenjuje na ograničeni način. Međutim, u nekim slučajevima, ova metoda je ključni u dijagnostici nekih virusnih infekcija u kojima se virus nije moguće izolirati ili otkriti ga u serološkim testovima (parvovirus enteritis pasa), ili kada je potrebno brzo dijagnosticirati (kruna-rotavirus infekcije).

Problem identifikacije virusa pod elektronskim mikroskopom omogućuje nam da riješimo upotrebu specifičnih protutijela. Elektronska mikroskopija s njihovom upotrebom zove se imunoelektronska mikroskopija. Pripreme za mikroskopiju se tretiraju s specifičnim protutijelima na specifičnu vrstu virusa i pregledavaju se pod elektronskim mikroskopom. U slučaju pozitivnog nalaza, ako je virus i antitijela su homologni vidno polje će biti vidljive virusi okružene antitijela.

fluorescentni postupak mikroskopija se primijeniti, ne samo za prikaz rezultata IFA, ali i za otkrivanje akumulacije virusa u stanicama jednostavnim fluorochroming omogućuje poboljšanje prirodni sjaj virusa nukleinske kiseline. No, na taj način se može odrediti samo virus grupu - koja sadrži DNA ili RNA.

6 je detekcija u stanicama tkiva tijela virusnih inkluzija. Intracelularna inkluzijska tijela formirana su u mnogim virusnim infekcijama i specifična su za svaku vrstu virusa po strukturi, lokaciji, boji itd. Stoga se ova metoda koristi u studijama bjesnoće, ptičje bolesti, infekcije pasa i adenovirusa.

7 skupina metoda je bioassay i imunološki test. Ove metode se također nazivaju i ekspresne metode, iako uvjetno zbog njihovog trajanja (od 1 dana do 30 dana).

Biotest je eksperimentalna infekcija s krvnim materijalom laboratorija ili prirodno osjetljivih životinja. Koristi se za reprodukciju karakterističnih kliničkih i patohanatomskih znakova za ovu virusnu bolest. Na primjer, Auezkina bolest se reproducira kod zečeva, bjesnoće kod miševa, slinavke i šapa kod zamoraca, itd. Prirodno osjetljive životinje se rijetko koriste za biološke testove i samo slučajevi reprodukcije tipičnih kliničkih znakova bolesti (ovaca, kozje, svinjske kuge, zarazna anemija konja)

Imunološko testiranje je bio-test na imunim i ne-imunim organizmima. Omogućuje vam razlikovanje bolesti.

Bioprobo se često stavlja na laboratorijske životinje, ali ne uvijek jamči točan rezultat.

U principu, sve gore navedene brze metode omogućuju dovoljno brzo reagirati na prisutnost virusa u materijalu i obliku, ali ne visoka točnost većina metoda, da se formira temelj staviti konačnu dijagnozu i, stoga, trebaju biti potvrđeni pouzdanim.

U tom pogledu, istodobno s brzim testovima koji se provode, ako je moguće, laboratoriji rade na drugom smjeru laboratorijske dijagnostike, koji se sastoji od izolacije i prepoznavanja virusa.

Izolirajte virus na živom sustavu. Da biste to učinili virusne suspenzije patmateriala zaraziti laboratorijskih životinja ili embrija kokošjih jaja ili kulture stanica. Prilikom odabira dnevni sustav uzima u obzir osjetljivost nje izlučiti virus, vrsti obliku životinja od biološkog materijala, preliminarne dijagnoze, tropizma virusa, itd Na primjer, ako se dobije tvar iz pilića inokulirane pilećih embrija, ako sisavaca, zaraza kulturu stanica iste vrste, da virus inficira u središnji živčani sustav inficiran intracerebralno provesti, ako je jetra tada intraperitonealno.. znakovi virusne replikacije u tijelu laboratorijskih životinja kliničkih simptoma, smrt i patologanatomicheskie izmenija u kokošjim embrijima smrt, patološke promjene ili hemaglutinirajuce properties extraembryonic tekućine u staničnim kulturama ili citopatogeni učinak YaV Lenie gemadsorbtsii. Prilagodba virusa u životni sustav može se produljiti, pa trošite do 4-5 slijepih prolaza. S negativnim rezultatom, slijepe arkade Istraživanje je zaustavljen, ali to ne znači odsutnost virusne infekcije kod pokusnih životinja. Razlog može biti uzimanje pogrešne i nepravilne prijenos biološkog materijala, što je rezultiralo virusa inaktiviranog ili jednostavno nije bio u njemu.

Identifikacija virusa provodi se proučavanjem njegovih svojstava. Proučavanje strukture, prisutnost hemaglutinacije aktivnosti, sposobnost gemadsorbtsii pogled citopatogenog učinka u kulturi stanica. Naravno definicija vrste simetrije broj capsomeres, oblik virusa nije moguće unutar praktičnih laboratorijima. Stoga su razvijeni jednostavniji testovi, pomoću kojih se može utvrditi da li izolirani virus pripada određenoj obitelji. To uključuje veličinu virion, je instaliran filtracijom kroz filtere s različitim veličinama pora, određivanje osjetljivosti na zraku, stabilnost na pH 3,0, je upotreba derivata deoksiuridin suzbijanju umnožavanje virusa samo DNA koja sadrži i na taj način omogućava da se odredi tip nukleinske kiseline virusa se proučava.

No, samo je moguće utvrditi vrstu virusa u serološkim reakcijama s dijagnostičkim serumima. Izbor reakcije ovisi o svojstvima virusa i sposobnostima laboratorija. Tako su virusi hemaglutinacije identificirani u RTGA, PGGAD, drugim virusima u RN, RNGA, RDP, DSC, MFA, ELISA.

Ako su studije provedene na istoj vrsti životinja iz kojih je snimljena biomaterijalna studija i ako su zabilježeni isti klinički znakovi kod zaraženih životinja, to ukazuje na pozitivan rezultat studija. Izolacija virusa na druge živote nije uvijek dokaz etiologije bolesti, osobito ako je virus izoliran iz njihovih dišnih puteva ili crijeva, gdje je često prisutan asimptomatski prijenos virusa. Osim toga, lažni pozitivni rezultati mogu se dobiti u vezi s izolacijom latentnih virusa iz životinja ili iz staničnih kultura. U tim slučajevima, potrebno je dokazati etiološku ulogu izoliranog virusa. Jedna od metoda može biti reprodukcija bolesti u prirodno osjetljivim životinjama. No, osim što je skupo, bolest se ne može reproducirati. Stoga, bez obzira na rezultate ovog područja laboratorijske dijagnoze, studije se provode u trećem smjeru.

U treći smjer laboratorijske dijagnostike nose serološku retrospektivnu dijagnostiku.

Retro (povratak) znači da se provodi dijagnoza prošle bolesti. Ova vrsta dijagnoze uključuje serološke studije krvnog seruma pacijenata i bolesnih životinja zbog prisutnosti antitijela na virus. Treba imati na umu da je pozitivan jedna studija, čak i ako je visok titar antitijela nema dijagnostičku vrijednost. Izuzetak može biti situacija u kojoj se potpuno pojavljuje novi virus na teritoriju. Prisutnost protutijela u krvi može biti posljedica prethodne bolesti, asimptomatske infekcije ili cijepljenja. Pozitivan rezultat takve istrage ukazuje samo na kontakt životinje s virusom, ali ne određuje kada je to bio. Serološki testovi su dijagnostički važni kada se otkrije povećanje titra antitijela na određeni virus. Za to su životinje dva uzorka krvnog seruma, po prvi put u ranoj fazi bolesti, a drugi put u 2- 3 tjedna kad je već nestala kliničke znakove bolesti. U oba seruma, korištenjem seroloških reakcija, određuje se titar antitijela za sumnjivo infektivno sredstvo. Ako je titar antitijela povećava do 4 ili više puta, to je dokaz da je životinja organizam nastavi infektivne bolesti uzrokovane patogenom na koje antitijelo je određena u serumu. Za ove serološke studije najčešće se koriste RN, IFA, RTGA, RNGA. Najpouzdaniji rezultati dobiveni su pH, koji može otkriti neutralizirajućih antitijela koje su odgovorne za zaštitu tijela od virusne infekcije. Unatoč retrospektivnu dijagnozu, ova linija virološkog istraživanja je vrlo značajna, daje ideju o širini širenja zaraze, dinamika njegove manifestacije (povećanje ili smanjenje broja seropozitivnih životinja) i omogućuje vam da poduzmu učinkovite mjere za otklanjanje virusnih infekcija, provoditi specifične i opće veterinarsko-sanitarne mjere, pružanje održive dobrobiti gospodarstva u odnosu na određenu virusnu infekciju.

Serološke metode istraživanja trebaju se široko koristiti za procjenu postvaccinalnog imuniteta. Poznato je da titar postvaccinalnih antitijela i postotak seropozitivnih životinja za praktičnog veterinara služi kao pouzdani vodič pri odlučivanju hoće li se ponovno cijepiti. Tako na farmama peradi u sadašnje vrijeme određuje se vrijeme cijepljenja za ptičju influencu na temelju rezultata sustavnih seroloških istraživanja od 10-15% zaliha. Slične "imunitetne usluge" trebaju biti organizirane za stočarske farme. Takva bi služba ispravno procijenila intenzitet colostralnog i postvaccinalnog imuniteta i planirala vrijeme cijepljenja svih skupina životinja

Retrospektivna identifikacija tipova i varijanti virusa prethodne infekcije nije manje važna za specifičnu prevenciju, a isto tako u ekološkom aspektu omogućuje poznavanje spektra interspecifične cirkulacije određenog virusa.

Dakle, dijagnoza svake virusne infekcije je samo složena, temeljena na epizootskim, kliničkim, pato-anatomskim i posebno laboratorijskim istraživanjima koja su odlučujuća u formulaciji konačne dijagnoze. Da bi se postigao brz i točan rezultat laboratorijskih istraživanja, kombiniraju se nekoliko metoda različitih viroloških smjerova, što omogućuje čvrsto vjerovanje u pouzdanost studija.

Datum slanja: 2015-07-23 | Prikazi: | Kršenje autorskih prava

38. Načela laboratorijske dijagnoze virusnih infekcija.

Laboratorijske studije imaju važnu ulogu u dijagnosticiranju zaraznih bolesti, propisivanju etiotropne terapije i praćenju učinkovitosti liječenja. Proces specifične laboratorijske dijagnoze temelji se na identifikaciji uzročnika i odgovoru ljudskog tijela tijekom zaraznog procesa. Sastoji se od tri koraka: prikupljanje materijala, njegova prijevoza (shpora№39), a njegova istraživanja u laboratoriju: 1) metoda virološki uključuje dva glavna koraka: odabir virusa i njihovu identifikaciju. Za izolaciju virusa koriste se stanične kulture, piljevine i ponekad laboratorijske životinje. Prisutnost virusa u zaraženim kulturama određena je razvojem specifične degeneracije stanica, tj. citopatogenog učinka, detekcija intracelularnih inkluzija i na osnovi otkrivanja antigena specifičnog imunoflorescencijom pozitivne reakcije gemadsorbtsii i hemaglutinacijskim. Virusi su identificirani imunološkim postupcima: inhibicije hemaglutinacije, fiksacija komplementa, neutralizacijom, taloženjem u imunofluorescencije gela. 2) Serološke reakcije; 3) Imunološka metoda (bioloških testova); 4) ELISA i PCR. Nakon dobivanja rezultata istraživanja i uzimajući u obzir epizootski i klinički podaci, utvrđena je konačna dijagnoza.

39. Uzimanje, priprema i prosljeđivanje pat. Materijal za virologa. Istraživanje.

Uzimanje, transport i ispitivanje pat. materijal je reguliran veterinarskim zakonodavstvom. Kada se uzme u obzir tropizam virusa - poželjno mjesto virusa u ovoj bolesti i patogenezu. Vrijeme od uzimanja pat. materijala do kraja njegove studije - 2-4 sata. Ako vam je potrebno više vremena - konzervirane (kemijske metode - 50% glicerina, fizičko zamrzavanje), ali ne i za luminescente. mikroskopija. Prijevoz u posebnom. posude s pratilima. dokument i kurir. Pripravak se sastoji u vađenju virusa iz stanica. Tekućina. materijal - filtriranje i centrifugiranje. Za pročišćavanje od bakterija - bakterija. filteri i antibiotici (500-2000 jedinica po 1 ml), od gljiva - fungicida (25 jedinica po 1 ml), držite 30-40 minuta, usjeva za hranu. okoliša (aerobes-MPA, MPB, NRM, anaerobe-Kitta-Tarozzi, gljive-Chapeka, Saburo). Gusti materijal za flaster: 1) uzmi materijal za flaster 1-1,5 g; 2) oni su tlo sa škarama; 3) rstirayut s sterilnim. staklo ili pijesak u mortu; 4) 10% -tna suspenzija s Hensovom formulom; 5) 2 puta smrznuto i odmrznuto; 6) filtriranje kroz filtar gaze; 7) centrifugiranje (3000 rpm, 15 min); 8) Supernatant je materijal koji sadrži viruse, provjerava se za bakterije (srednje), dodaju se antibiotici i fungicidi.

40. Mikroskopska metoda istraživanja u virologiji.

1. Svjetlosna mikroskopija: 1) otkrivanje virusa velikih boginja (metoda posrebrivanja Morozov); 2) otkrivanje stanice inkluzije (ovo nakupljanje dijelova viriona ili stanica ili produkata reakcije na virus, oni mogu biti i vnutriyaderye citoplazmi); 3) otkrivanje CPD virusa (zaokruživanje, fragmentacija, smrt); 4) otkrivanje simplasta; 5) rad s C / K; 6) procjena serologa. (ELISA, RGAd, RTGAd).. 2.Lyuministsentnaya Mikroskopija: jezgra - ozračivanje UV-zrakama uzbuđenih C, a zatim premjestiti na početno stanje uz oslobađanje energije kao intenziteta emisije svjetlosti je procijenjena u križevima (izumrud Ro ++++ =; ZEL ++ =... +; ZEL žute = ++;. = žuta +, bez luminiscencija = -).Prior zračenje boja priprema fluorokromi (FITC, akredin narančasta, žuta, rodamin).To protiv flyuorohromirovanie.. Komplicirano - MF.A.Sut MFA - specifičan. interakcija protutijela sa obilježenim fluorochrom serumom (konjugat). 3. Elektronska mikroskopija: 1) detekcija bilo kojeg virusa; 2) proučavanje njegove veličine, oblika, strukture, tipa simetrije, reprodukcije; 3) proučavanje interakcije virusa sa stanicom.

Načela dijagnoze virusnih infekcija

Metode dijagnoze virusnih infekcija

Tema: "Metode mikrobiološke dijagnoze virusnih infekcija. Sprječavanje virusne infekcije »

Student treba znati:

-morfologija, ekologija, fiziologija virusa, metode njihove studije;

Sadržaj:

-temelj epidemiologije virusnih infekcija (vrste infekcija);

-osnove kemoterapije i kemoprofilaksa virusne infekcije;

-čimbenici imuniteta u virusnim infekcijama.

Student bi trebao biti u mogućnosti:

-provoditi prevenciju virusnih infekcija;

-napraviti algoritme za djelovanje u epidemiji.

Pitanja za frontalnu raspravu:

1. Dajte koncept virusa. Opišite značajke strukture i života čestice virusa.

2. Koji čimbenici štite ljudsko tijelo od virusa.

3. Nazvati grupu i mehanizam djelovanja lijekova za viruse. Dajte primjere lijekova.

4. Kakve su vrste infekcije uzrokovane virusima?

5. Ime predstavnika crijevnih, krvnih, respiratornih virusnih infekcija, infekcija kože i sluznice.

6. Dati koncept "Epidemija proces", opisuju strukturu širenja infekcije među stanovništvom.

7. Ime, kao akcije, likvidiranje proces epidemije su pozvani.

Zapišite definicije metoda za proučavanje virusnih infekcija.

Zarisite u intracelularne atlasa inkluzije s malim bogovima (Gvarnierijevu tijelu), s bjesnoćom (tijelo Babesh-Negrija).

3. Izraditi plan antiepidemijskih mjera za virusnu infekciju (infekciju određuje učitelj).

Kratke teorijske prijedloge

Širenje mogućnosti u liječenju i prevenciji virusnih bolesti pomoću antivirusnih lijekova, imunomodulatora i cjepiva s različitim mehanizmima djelovanja zahtijeva brzu i točnu laboratorijsku dijagnozu. Uska specifičnost nekih antivirusnih lijekova također zahtijeva brzu i visoko specifičnu dijagnozu zaraznog agensa. Postojala je potreba za kvantitativnim metodama za određivanje virusa za praćenje antivirusne terapije. Uz utvrđivanje etiologije bolesti, laboratorijska dijagnostika je važna u organizaciji antiepidemijskih mjera.

Rana dijagnoza je od prvih slučajeva infekcije epidemije omogućuje pravodobno mjere kontrole. - Karantena, hospitalizacija, cijepljenje, itd provedbi eliminacije zaraznih programa bolesti, kao što su male boginje, pokazalo je da čim se ispune ulogu laboratorijska dijagnostika. Ona igra važnu ulogu u laboratorijskoj dijagnostici krvnih transfuziju i ginekološkoj praksi, na primjer, identifikacija darivatelja zaraženih virusom humane imunodeficijencije (HIV), hepatitis B virus (HBV), rubeole i dijagnostici infekcije citomegalovirusom u trudnica.

Metode dijagnoze virusnih infekcija

Za uspješnu izolaciju virusa klinički se materijal treba uzeti u skladu s patogenezom navodne bolesti i što je prije moguće.

U pravilu, poduzmite:

- s respiratornim infekcijama - iscjedak nazofaringealnog sustava;

- s enterovirusnim infekcijama - ispiranje i izmet (reo-, enterovirus);

- s lezijama kože i sluznice - strugotine, sadržaj blistera (herpes, piletina);

- s exanthemal infekcijama - flushes (ospice, rublja);

- s arbovirusnim infekcijama - krv, cerebrospinalna tekućina.

1. Brze (eksprimirane metode) - izravna otkrivanja virusa ili njegovih komponenti (antigeni, NK), uključivanja izravno u klinički materijal.

A. Virousoskopska metoda sastoji se u otkrivanju virusa u testnom materijalu pod mikroskopom. Najčešći elektronski mikroskop. Svjetlosna mikroskopija zbog zanemarive veličine virusa praktički se ne koristi. Ovom metodom možete odrediti vrstu NC-a, veličinu viriona, oblik viriona i također identificirati unutarstanične inkluzije, koji se formiraju u zahvaćenim stanicama s određenim infekcijama.

II. Virološka metoda temelji se na:

kultiviranje osjetljivih virusa u biološkim sustavima (staničnim kulturama pileći embrij organizmi laboratorijskih životinja), što ukazuje na njih od citopatogenog učinka na (1) biološkog sustava, identificiranje inhibicijom aktivnosti antivirusnih virusa relevantnih antigena (Slika 2).

Sl. 1. Citopatski učinak virusa na stanicu: A-normalni rast, B-CDD virusa po stanici

Slika 2. Inhibicija virusa antitijelima

Virološko istraživanje je "zlatni standard" virologije i trebao bi biti proveden u specijaliziranom virologijskom laboratoriju. Trenutačno se upotrebljava praktički samo u kontekstu epidemije izbijanja određene virusne zarazne bolesti.

III. Serološka metoda - definicija antivirusnih antitijela (optimalno - IgM) i / ili određivanje dinamike rasta njihovih titara za određeno razdoblje bolesti u uparenim serumima. Smatra se da dijagnostički značaj povećava titar protutijela 4 i više puta.

Metoda uparenih seruma:prikupljamo vensku krv u količini od 10 ml na početku bolesti i na kraju, pripremimo serum, odredimo broj antitijela u prvom i drugom serumu.

U ovom slučaju, četverostruki porast titra antitijela u drugom serumu u većini slučajeva služi kao pokazatelj tekuće ili svježe prenosive infekcije. U istraživanju jednog seruma koji se uzima u akutnom stadiju bolesti, detekcija antitijela IgM klase, koja ukazuje na akutnu infekciju, je dijagnostička važnost.

Suvremene dijagnostičke metode:

1. PCR-detektiraju postojane viruse u NK, koji su u kliničkom materijalu, koje je teško otkriti ili se ne mogu otkriti drugim metodama.

2. Radio-izotopna imunosna analiza (RIA) - metoda temelji se na naljepnici protutijela radioizotopima, što je omogućilo visoku osjetljivost u određivanju virusnog antigena. Metoda je naširoko korištena tijekom osamdesetih godina, posebno za određivanje markera HBV i drugih virusa koji nisu uzgajani. Nedostatci metode uključuju potrebu za radom s radioaktivnim tvarima i upotrebom skupe opreme (gama brojači).

3. Immunoenzimska analiza (ELISA) - Imunoenzimatske metode za određivanje virusnih antigena su načelno slične RIF, no temelje se na označavanju antitijela s enzimima, a ne s bojama. Najčešće korištena hrena peroksidaza i alkalna fosfataza također su koristili b-galaktozidazu i b-laktamazu. Označena antitijela se vežu na antigen, a ovaj kompleks se detektira dodavanjem supstrata za enzim s kojim su antitijela konjugirana. Konačni produkt reakcije može biti u obliku netopljivog ostatka, a zatim je kut se izvodi korištenjem konvencionalnih svjetlosnog mikroskopa, ili topivi produkt koji je obično obojen (ili može fluoresciraju ili luminesce) i snimljene instrumentalno.

Budući da se topljivi antigeni mogu mjeriti s ELISA, nema potrebe za intaktnim stanicama u uzorku i stoga se mogu koristiti različite vrste kliničkog materijala.

Druga važna prednost ELISA metode je sposobnost kvantificiranja antigena, što mu omogućuje da se koristi za procjenu kliničkog tijeka bolesti i učinkovitosti kemoterapije. ELISA, kao i RIF, mogu se koristiti u izravnim i neizravnim verzijama.

ELISA u krutoj fazi, koja daje topljivi obojeni reakcijski proizvod, pronašao je najveću raspodjelu. ELISA se može upotrijebiti i za određivanje antigena (zatim na čvrstu fazu - dno polistirenske ploče, antitijela se primjenjuju) i određivanje antitijela (antigeni se tada primjenjuju na čvrstu fazu).

4. Reakcija imunofluorescencije (RIF) - Metoda se temelji na upotrebi protutijela vezanih za boju, na primjer fluorescein izotiocijanata. RIF se široko koristi za otkrivanje virusnih antigena u materijalu pacijenta i za brzu dijagnozu.

U praksi se koriste dvije verzije RIF-a: ravno i posredan. U prvom slučaju primjenjuju se protutijela koja se obilježavaju bojama virusima koji se primjenjuju na inficirane stanice (razmaz, kultura stanica). Dakle, reakcija se nastavlja u jednoj fazi. Nedostatak metode je potreba za velikim brojem konjugiranih specifičnih seruma mnogim virusima.

Indirektnu izvedbi RIF o materijalu se primjenjuje na određeni u serumu antitijela koja se vežu na virusni antigen koji se nalazi u materijalu, a zatim laminira antispecies serumu gama-globulin u životinji, naznačen time, da priprema specifični imuni serum, kao što je anti-zec, antiloshadinaya i m. P. Ovih neizravna verzija RIF-a sastoji se u potrebi samo za jednu vrstu označenih protutijela.

RIF metoda se naširoko koristi za brzo dešifriranje etiologije akutnih respiratornih virusnih infekcija u analizi slojova s ​​mukozne membrane gornjeg dišnog trakta. Uspješna upotreba RIF-a za izravno otkrivanje virusa u kliničkom materijalu moguće je samo ako sadrži dovoljno velik broj inficiranih stanica i malo kontaminacije mikroorganizmima koji mogu dati nespecifični sjaj.

5. Ostale dijagnostičke metode -

RTGA se koristi za dijagnosticiranje bolesti uzrokovanih virusa hemaglutinacijom. Temelji se na vezanju antitijela pacijentovog seruma s dodanim standardnim virusom. Indikator reakcije su eritrociti agglutinated virusa (formiranja karakteristiku „krovni”) u odsustvu specifičnih antitijela i odlaže na donju neagglyutinirovannymi ako postoje.

RSK je jedna od tradicionalnih seroloških reakcija i koristi se za dijagnosticiranje mnogih virusnih infekcija. U reakciji sudjeluju dva sustava: serumska antitijela pacijenta + standardni virus i eritrociti ram + protutijela na njih, kao i titrirani komplement. Kada se protutijela i virusa podudaraju, ovaj kompleks veže komplement i ne postoji liza eritrocita janjadi (pozitivna reakcija). S negativnim RNA dopunama favorizira se liza crvenih krvnih stanica. Nedostatak metode je njegova nedovoljno visoka osjetljivost i poteškoća u standardiziranju reagensa.

Da bi se uzela u obzir značaj RSK, kao i RTGA, potrebno je titrirati uparene serume, tj. Uzimanje u oba slučaja i tijekom perioda rekvalvecije.

RPGA je aglutinacija crvenih krvnih stanica (ili polistirenskih kuglica) senzibiliziranih virusnim antigenom u prisutnosti protutijela. Na eritrocitima, bilo koji virus može biti sorbiran, bez obzira na prisutnost ili odsutnost hemaglutinacijske aktivnosti u njima. U vezi s prisutnošću nespecifičnih reakcija, serum se proučava u razrjeđenju od 1:10 ili više.

RNGA je aglutinacija eritrocita osjetljivih na specifična antitijela u prisutnosti virusnih antigena. Najveća raspodjela RHPHA bila je u otkrivanju HBs-antigena u oba pacijenta i donora krvi.

Načela dijagnoze virusnih infekcija;

U svrhu laboratorijske dijagnoze virusnih infekcija koriste se tri skupine metoda:

1. Brze (ekspresne) metode - izravno otkrivanje patogena u kliničkom materijalu (od pacijenta).

2. Virološka metoda - izolacija virusa iz kliničkog materijala i njezina identifikacija.

3. Serološka metoda - određivanje rasta (dinamike) antitijela na virus (za određeno razdoblje bolesti) u pacijentovim parenteralnim serumima.

Izbor metode ovisi o biološkim svojstvima virusa, razdoblju

bolesti, kao i tehničke opreme laboratorija.

Brza (ekspresna) metoda. Temelji se na brzom otkrivanju i

Identifikacija virusa ili njegove antigene uključaka u biosirovine (razmazima, biopsije, epitelne talog leukocitima histoloških presjeka, odsjek materijala):

a) Postupak serološka - određivanje virusnog antigena u materijalu s dijagnostičkim antivirusno seruma u brzim reakcija: Imunofluorescencija (IF), enzimskog imunosorbent testa (ELISA), radioimunotestom (RIA), protu mmmunoelektroforez (WIEF), imunološki elektronska mikroskopija (IEM), izravna reakcija i obrnuto pasivni hemaglutinaciju (PHA, ROPGA), reverzne pasivne reakcije inhibicije hemaglutinacijskim (RTOPGA);

b) mikroskopska metoda - otkrivanje elementarnih čestica ili inkluzija virusa pomoću svjetlosne, luminescentne ili elektronske mikroskopije:

c) molekularna hibridizacija - hibridizacija komplementarnih niti DNA ili RNA (virus i proba).

Virološka metoda. Na temelju uzgoja virusa

osjetljivih staničnih sustava (stanična kultura, kokošje embrij,

1. Ograda proučavanog materijala.

2. Odabir i dobivanje osjetljivog sustava ispitivanja, određujući njezinu održivost.

3. Infekcija po principu citotrofizma.

4. Pokazatelj (otkrivanje) virusa.

5. Identifikacija virusa temelji se na:

a) utvrđivanje virusnih antigena u testnom sustavu uz pomoć seroloških reakcija (IF, ELISA, RPGA, RTGA, RSK, PH, VIEF itd.);

b) patohistološko ispitivanje organa i tkiva;

c) klinički simptomi;

d) biološki uzorci (keratoconjunctival, itd.). Procjena metode: odnosi se na rane osjetljive metode istraživanja. Nedostaci: složenost interpretacije rezultata izolacije postojanih virusa; tehnička složenost. Serološka metoda. Temelji se na rastu titra antitijela (dobitaka) za određeno razdoblje bolesti u paru seruma pacijenata ili ljudi koji su se oporavili - koristeći skup virusnih dijagnostika. Upareni serumi - dva seruma uzeta od jednog pacijenta na početku bolesti i nakon 1-4 tjedana. Serološke reakcije (RPGA, RSK, RTGA, PH, ELISA, itd.) Stavljaju se istodobno s dva seruma kako bi se odredile i usporedile njihove titre. Za ranu dijagnozu bolesti određena je prisutnost IgM u serumu (u neizravnom IF i ELISA).

NAČELA DIJAGNOSTIKE VIRALNIH INFEKCIJA

U svrhu laboratorijske dijagnoze virusnih infekcija koriste se 3 skupine metoda:

1. Brze (ekspresne) metode - izravno otkrivanje patogena u kliničkom materijalu (od pacijenta).

2. Virološka metoda - izolacija virusa iz kliničkog materijala i njezina identifikacija.

3. Serološka metoda - određivanje rasta (dinamike) antitijela na virus (za određeno razdoblje bolesti) u pacijentovim parenteralnim serumima.

Izbor metode ovisi o biološkim svojstvima virusa, razdoblju bolesti i tehničkoj opremi laboratorija.

Izraziti dijagnoza se temelji na brzo otkrivanje i identifikaciju virusnih antigena ili njegovog uključivanja u biosirovine (razmazima, biopsije, epitelne talog leukocitima histoloških sekcija, presjek materijala).

a) serološko - određivanje virusnog antigena u materijalu s dijagnostičkim antivirusno seruma u brzim reakcija: imunofluorescencije (IF), enzimskog imunosorbent testa (ELISA), radioimunotestom (RIA), brojač immunoelectrophoresis (WIEF), imunološki elektronska mikroskopija (IEM), reakcija izravno i reverzne pasivne hemaglutinacije (PHA, ROPGA), reakcijska inhibicija reverzne pasivne hemaglutinacije (RTPGA);

b) mikroskopska metoda - detektiranje elementarnih čestica ili inkluzija virusa pomoću svjetlosne, luminescentne ili elektronske mikroskopije;

c) molekularna hibridizacija - hibridizacija komplementarnih niti DNA ili RNA (virus i sonda).

Virološka dijagnoza temelji se na uzgoju virusa na osjetljivim staničnim sustavima (kultura stanica, piletina, laboratorijske životinje).

1. Ograda proučavanog materijala.

2. Odabir i dobivanje osjetljivog sustava ispitivanja, određujući njezinu održivost.

3. Infekcija po principu citotrofizma.

4. Pokazatelj (otkrivanje) virusa.

5. Identifikacija i tipizacija virusa vrši se na temelju:

a) određivanje antigena virusa u testnom sustavu pomoću seroloških testova;

(IF, IFA, RPGA, RTGA, RSK, RN, VIEF, itd.);

b) patohistološko ispitivanje organa i tkiva, kao što je CPD;

c) klinički simptomi, biološki uzorci (keratoconjunctival, itd.).

Metoda se odnosi na rane visoko-osjetljive metode istraživanja.

Nedostaci: složenost interpretacije rezultata izolacije postojanih virusa; tehnička složenost.

Serološka metoda određuje povećanje titra (povećanje protutijela) za određeno razdoblje bolesti u parenteralnim serumima bolesnika ili ljudi koji su se oporavili - koristeći skup virusnih dijagnostika.

Upareni serumi - dva seruma uzeta od jednog pacijenta na početku bolesti i nakon 1-4 tjedna. Serološke reakcije (RPGA, RSK, RTGA, PH, ELISA, itd.) Stavljaju se istodobno s dva seruma kako bi se odredile i usporedile njihove titre. Za ranu dijagnozu bolesti određena je prisutnost Ig M u jednom serumu (u neizravnom IF i ELISA).

Načela i metode dijagnoze virusnih infekcija

Sustav mjera za borbu protiv virusnih infekcija uključuje: dijagnozu liječenja i prevencije.

Dijagnoza igra presudnu ulogu u sustavu mjera za suzbijanje bolesti virusne etiologije

Dijagnoza (od grčke riječi dijagnoza - prepoznavanje) je definicija prirode i suštine bolesti, utvrđivanje uzroka i oblika. Proces dijagnosticiranja naziva se dijagnostika. Sastoji se od tri faze:

Faza 2 - analiza i procjena rezultata istraživanja

Faza 3 - zaključak o uzroku, obliku bolesti i stanju bolesnog organizma.

Brzo i pravilno dijagnosticirano, to je 50% uspjeha u borbi protiv virusne infekcije, to vam omogućava da poduzmete ciljane mjere kako biste ga eliminirali s najmanjim gubitkom. Izbijanje virusne infekcije može se usporediti s požarom. Primjećeno je ranije "gorenje", a ranije je počelo "gašenje", manje štete.

Primjer: Poljoprivredna perad u blizini Lenjingrada 1986. izbila je Newcastlesku bolest. Dijagnoza je provedena tek nakon 2 tjedna i pogrešna (za gripe). Kao rezultat zakašnjelo i netočne dijagnoze, izgubljeno je 3 milijuna ptica. Primjer pokazuje da je u rukama veterinara gospodarstvo zemlje. Stoga bi dijagnoza virusne bolesti trebala biti što je prije moguće i što je točnije moguće.

Ako se sumnja na bilo koju zaraznu bolest, uključujući i dijagnozu virusa, cjelovito se utvrđuje na temelju sljedećih podataka:

1 epizootski podaci

2 podaci o kliničkim ispitivanjima

3 od ovih patohanatomskih ispitivanja

4 laboratorijska podataka

U procesu dijagnosticiranja razlikuju se dvije faze:

Prva je kliničko-epizootska. Ova faza se provodi izravno na mjestu infekcije virusom (u farmi, vrtiću, farmi peradi). Na temelju prikupljenih podataka (epizootski, klinički i patoanatomski) uspostavlja se preliminarna dijagnoza.

Druga je laboratorijska dijagnoza. Obavlja se u specijaliziranoj ustanovi - virološkom laboratoriju ili odjelu. Provedena je studija o materijalu dobivenom iz mjesta podrijetla virusne infekcije i uzimajući u obzir preliminarnu dijagnozu. Na osnovu rezultata laboratorijskih testova utvrđuje se konačna dijagnoza virusne infekcije.

Prva faza započinje prikupljanjem i proučavanjem epidemioloških podataka. To uključuje informacije o prisutnosti virusne infekcije u tom području i što; o broju bolesnih životinja, njihovoj vrsti, dobi, spolu, fiziološkom stanju; sezonski bolesti, prisutnost vektora i spremnika, infekcije životinja kontakt s izvorom zaraze; stopa širenja bolesti; o dolasku novih životinja, životinjskim preuređenjima, cijepljenju i imunitetu. Na primjer, slinavke i šapa karakterizira: uobičajena u graničnom području na granici s problematičnom području ove bolesti javlja se samo još vrhom kopitarima brzo pokrivenost stanovništva u kratkom vremenskom razdoblju, nositelji mogu biti bilo životinje i ptice i ljudi, proizvoda životinjskog podrijetla, itd Klinički pregled bolesnika početi sa životinjskom habitusa (temperatura, puls, disanje, položaj tijela u prostoru, temperament, ustav, debljina itd) i povijesti. Zatim se ispituje svaki sustav tijela primjećujući odstupanje od normalnog stanja.

Patološke promjene se uspostavljaju na otvaranju pali ili prisilno ubijene životinje. Promjene u organima i tkivima zabilježene su u usporedbi s normom, prisutnost neoplazmi.

U nekim slučajevima, klinički i morfološke promjene su tako tipično da je moguće postaviti dijagnozu (boginje, slinavke i šapa). Međutim, često je bolest atipična ili se znakovi bolesti odmah promatraju s nekoliko infekcija. Također je nedavno pronađen mješovite infekcije, kada je bolest uzrokovana ne jedan, nego dva ili više uzročnici (dva virusa ili virusa i bakterija).

Drugi primjer je kada, čak i uz takve infekcije kao FMD laboratorijskim ispitivanjima su dužni odrediti vrstu i podvrstu, jer imunitet štiti samo od vrste FMD virusa koja je formirana.

Stoga, u svim slučajevima, preliminarnu dijagnozu mora biti potvrđena laboratorijskim testovima.

Dakle, kao rezultat kliničke i epidemiološke analize stotina virusnih bolesti veterinara zaustavlja na 2-3 infekcija i pokazuje ih u popratnom dokumentu za biomaterial, koja ih ostavlja u virologiju laboratoriju.

Rezultati laboratorijskih istraživanja uvelike ovise o ispravnosti uzimanja i slanja biomaterijalnog (patološkog) materijala za ove studije.

Osnovni zahtjevi za primanje i prosljeđivanje biomaterijala su sljedeći:

Materijal se uzima na početku kliničke manifestacije virusne bolesti. Budući da se maksimalni sadržaj virusa u tkivima tijela točno promatra tijekom tog perioda infekcije i ostaje na dovoljnoj razini samo nekoliko dana. Nakon sedmog-osmog dana bolesti, a pogotovo ako je životinja umrla da bi izolirala virus iz uzorka, gotovo je nemoguće.

2 Materijal mora biti svjež. To znači da materijal traje najviše 1-2 sata nakon smrti ili prisilnog klanja životinje. Budući da je titar virusa u tkivima nakon smrti životinje brzo smanjen kao rezultat autolize tkiva i reprodukcije mikroorganizama.

3 Pri sterilizaciji biomaterijala primjećuje se sterilnost. Manje onečišćenja materijala od drugih mikroorganizama, lakše je otkriti i izolirati pravi uzročnik infekcije.

4 Pri uzimanju biomaterijala uzeti u obzir tropizam virusa i odabrati one tkiva i organe u kojima se virus reproducira i akumulira u tijelu.

5 Preuzeti materijal, ako je nemoguće odmah isporučiti u laboratorij kako bi se zadržao aktivnost virusa. U tu svrhu, zamrzavanje biomaterijala se najčešće koristi ili očuva ugrađivanjem sterilne otopine glicerina u 50%.

Cijeli red uzorkovanja krmenog materijala, njegovo očuvanje i transport za specifične virusne infekcije reguliran je posebnom uputom iz Veterinarskog zakonodavstva, Vol.2, str. 155.

U virološkom laboratoriju dobivena biomaterijal se uzima i priprema za proučavanje. Zbog toga je tiskan, oslobođen od konzervansa, odvažen i podijeljen u 2-3 dijela (jedan dio materijala pohranjen je do kraja studije). Ako je potrebno, dio je materijala za bakteriološke i mikološke preglede

Uzimajući u obzir sadržaj pratećeg dokumenta, pripremljen je studijski plan za virusne infekcije koje su navedene u njima.

Postoje tri područja laboratorijske dijagnoze virusnih infekcija:

1 Otkrivanje virusa ili tragovi njegove prisutnosti u biomaterijalu korištenjem ekspresnih metoda.

Izolacija virusa iz biomaterijala i njegova identifikacija.

Retrospektivna serološka dijagnoza virusnih infekcija.

Glavni cilj laboratorijskih istraživanja je postizanje brzog i točnog rezultata, pa proučavam biomaterijal barem dvije metode različitih smjerova.

Prva metoda omogućuje vam da što brže odgovorite, a drugi način (pouzdaniji) treba potvrditi rezultat prvog. Ova metoda istraživanja daje povjerenje u ispravnost dobivenih rezultata. I prema ovom rezultatu laboratorijskog istraživanja biomaterijala, izrađena je konačna dijagnoza za virusnu infekciju.

Razmotrimo što su metode uključene u svaki smjer laboratorijske dijagnostike.

Prvi smjer laboratorijske dijagnoze je izričita metoda

1 skupina metoda omogućuje otkrivanje genoma (nukleinskih kiselina) virusa u biomateričkoj. Ovo je metoda DNA probe i lančane reakcije polimeraze (PCR). Najčešće u laboratorijskoj dijagnostici koriste PCR. Trenutno, ova reakcija je najosjetljivija i specifičnija, čime se identificira do jedne molekule nukleinske kiseline virusa u apsolutno bilo kojem materijalu koji se istražuje.

2 skupina metoda omogućuje otkrivanje virusnih antigena u biomateričkoj. Virusi imaju specifične za svaku vrstu proteina u kapsidu, super kapsidu (vanjskim antigenom) i jezgri (unutarnji antigeni). Stoga, nakon što su dijagnostički specifični serumi ili imunoglobulini na određene antigene virusa, moguće je detektirati virus u biomateričkoj serološkim reakcijama. Najosjetljiviji od njih su reakcija imunofluorescencije-RIF (MFA), enzimski imunoanaliza je ELISA, a radioimunska analiza je RIA. Zatvorite osjetljivost RNGA. Manje osjetljive su reakcija difuzijske precipitacije - RDP, reakcija fiksacije komplementa - RBC i druge.

Sve reakcije se temelje na interakciji sa specifičnim antitijelima homolognih virusnih antigena da bi se formirao kompleks antigen-antitijelo. Otkrijte kompleks na mnoge načine. Tako, u RIF od boje luminiscencije su povezani sa specifičnim antitijelima pod fluorescentnim mikroskopom na ELISA djelovanjem enzima vezana na specifična protutijela u RIA za radioaktivnog zračenja izotop vezanog na antitijela u IHA od aglutinacije senzibiliziranih (napunjenih) antitijela eritrocita u DTM od precipitinsku liniju agaroznom gelu, promjena u RSC hemolitička sustav, koji se dodaje u reakcijsku smjesu, i tako dalje.

RIF, IFA i RIA, RNGA su univerzalni, jednostavni u tehnici izvedbe, ne zahtijevaju sterilnost materijala i omogućuju dobivanje rezultata u roku od 2-4 sata.

Potrebno je oko dva dana da RNC i RDD dobiju odgovor, tako da se trenutačno rjeđe koriste. RSK za određivanje vrste virusa slinavke i šapa, RDP u dijagnozi bjesnoće IRT stoke, kuge pasa (čak se može koristiti i truljenje).

4 je detekcija virusnih hemaglutinina u biomateričkoj. Hemaglutini su površinski receptori virusa, pomoću kojih se može adsorbirati na eritrocite i spojiti ih zajedno. Identificirajte takve viruse pomoću reakcije hemaglutinacije (RGA).

Hcmaglutiniranim sojevima virusa aktivnost nije isti onaj drugi ne mogu. hemaglutinacije uvjeti su različiti: pH, temperature (4, 22, 37 ° C), prisutnost Ca iona, natrij magnezij vrste koje eritrocita (spol, dob, tjelesna stanje). Hemaglutinirajuće svojstva u virusi su stabilniji od zarazne, tako da se mogu manifestirati čak i kada se virus ne pokazuje infektivnost. RSA služi za detekciju biološkog materijala na virus gripe, virus parainfluence, virusa IRT. Npr distribucija virusa gripe i virus bolesti u tijelu nyukaslskoy kokoši i pilića su različite. Uz gripe u slezeni jetri i plućima pilića i kokoši uvijek naći puno hemaglutinina 1: 1024, a za Newcastle hemaglutinina bolest otkriti samo 20 jednodnevnih pilića od 1: 128, a kokoši ne. Dakle, ova metoda može razlikovati ove dvije bolesti u roku od 2 sata.

Prisutnost virusnih hemaglutinina često je maskirana prisustvom inhibitora složenog sastava koji dolaze iz stanica tkiva u kojima se virus umnožava. Oni se mogu ukloniti zagrijavanjem, obradom s acetonom, tripsinskim eterom, brzom centrifugiranjem.

Ali često u biomaterijalnoj, koncentracija virusa nije adekvatna i stoga se ova reakcija uglavnom koristi nakon nakupljanja virusa u živom sustavu.

5 skupina metoda omogućuje upotrebu mikroskopije za otkrivanje virusa virusa u biomateričkoj. Prva metoda je virusoskopija - otkrivanje velikih virusa pod svjetlosnim mikroskopom poslije posebnog bojenja, što omogućuje povećanje i kontrasta viriona. VIRUSOSKOPIJA se koristi samo za dijagnozu infekcija velikih boginja, jer se samo svjetlo za mikroskop može vidjeti virus malih boginja.

Virije drugih virusa otkrivene su pod elektronskim mikroskopom. Ova metoda dijagnoze je vrlo skupo jer zahtijeva skupu opremu, osoblje i kompleksnu pripremu materijala za istraživanje. Osim toga, morfologija viriona može odrediti samo svoju obitelj, ali ne i vrstu. Stoga se ova metoda primjenjuje na ograničeni način. Međutim, u nekim slučajevima, ova metoda je ključni u dijagnostici nekih virusnih infekcija u kojima se virus nije moguće izolirati ili otkriti ga u serološkim testovima (parvovirus enteritis pasa), ili kada je potrebno brzo dijagnosticirati (kruna-rotavirus infekcije).

Problem identifikacije virusa pod elektronskim mikroskopom omogućuje nam da riješimo upotrebu specifičnih protutijela. Elektronska mikroskopija s njihovom upotrebom zove se imunoelektronska mikroskopija. Pripreme za mikroskopiju se tretiraju s specifičnim protutijelima na specifičnu vrstu virusa i pregledavaju se pod elektronskim mikroskopom. U slučaju pozitivnog nalaza, ako je virus i antitijela su homologni vidno polje će biti vidljive virusi okružene antitijela.

fluorescentni postupak mikroskopija se primijeniti, ne samo za prikaz rezultata IFA, ali i za otkrivanje akumulacije virusa u stanicama jednostavnim fluorochroming omogućuje poboljšanje prirodni sjaj virusa nukleinske kiseline. Ali na taj način moguće je odrediti samo skupinu virusa - DNA ili RNA koji sadrže.

6 je detekcija u stanicama tkiva tijela virusnih inkluzija. Intracelularna inkluzijska tijela formirana su u mnogim virusnim infekcijama i specifična su za svaku vrstu virusa po strukturi, lokaciji, boji itd. Stoga se ova metoda koristi u studijama bjesnoće, ptičje bolesti, infekcije pasa i adenovirusa.

7 skupina metoda je bioassay i imunološki test. Ove metode se također nazivaju i ekspresne metode, iako uvjetno zbog njihovog trajanja (od 1 dana do 30 dana).

Biotest je eksperimentalna infekcija s krvnim materijalom laboratorija ili prirodno osjetljivih životinja. Koristi se za reprodukciju karakterističnih kliničkih i patohanatomskih znakova za ovu virusnu bolest. Na primjer, Auezkina bolest se reproducira kod zečeva, bjesnoće kod miševa, slinavke i šapa kod zamoraca, itd. Prirodno osjetljive životinje se rijetko koriste za biološke testove i samo slučajevi reprodukcije tipičnih kliničkih znakova bolesti (ovaca, kozje, svinjske kuge, zarazna anemija konja)

Imunološko testiranje je bio-test na imunim i ne-imunim organizmima. Omogućuje vam razlikovanje bolesti.

Bioprobo se često stavlja na laboratorijske životinje, ali ne uvijek jamči točan rezultat.

U principu, sve gore navedene brze metode omogućuju dovoljno brzo reagirati na prisutnost virusa u materijalu i obliku, ali ne visoka točnost većina metoda, da se formira temelj staviti konačnu dijagnozu i, stoga, trebaju biti potvrđeni pouzdanim.

U tom pogledu, istodobno s brzim testovima koji se provode, ako je moguće, laboratoriji rade na drugom smjeru laboratorijske dijagnostike, koji se sastoji od izolacije i prepoznavanja virusa.

Izolirajte virus na živom sustavu. Da biste to učinili virusne suspenzije patmateriala zaraziti laboratorijskih životinja ili embrija kokošjih jaja ili kulture stanica. Prilikom odabira dnevni sustav uzima u obzir osjetljivost nje izlučiti virus, vrsti obliku životinja od biološkog materijala, preliminarne dijagnoze, tropizma virusa, itd Na primjer, ako se dobije tvar iz pilića inokulirane pilećih embrija, ako sisavaca, zaraza kulturu stanica iste vrste, da virus inficira u središnji živčani sustav inficiran intracerebralno provesti, ako je jetra tada intraperitonealno.. znakovi virusne replikacije u tijelu laboratorijskih životinja kliničkih simptoma, smrt i patologanatomicheskie izmenija u kokošjim embrijima smrt, patološke promjene ili hemaglutinirajuce properties extraembryonic tekućine u staničnim kulturama ili citopatogeni učinak YaV Lenie gemadsorbtsii. Prilagodba virusa u životni sustav može se produljiti, pa trošite do 4-5 slijepih prolaza. S negativnim rezultatom, slijepe arkade Istraživanje je zaustavljen, ali to ne znači odsutnost virusne infekcije kod pokusnih životinja. Razlog može biti uzimanje pogrešne i nepravilne prijenos biološkog materijala, što je rezultiralo virusa inaktiviranog ili jednostavno nije bio u njemu.

Identifikacija virusa provodi se proučavanjem njegovih svojstava. Proučavanje strukture, prisutnost hemaglutinacije aktivnosti, sposobnost gemadsorbtsii pogled citopatogenog učinka u kulturi stanica. Naravno definicija vrste simetrije broj capsomeres, oblik virusa nije moguće unutar praktičnih laboratorijima. Stoga su razvijeni jednostavniji testovi, pomoću kojih se može utvrditi da li izolirani virus pripada određenoj obitelji. To uključuje veličinu virion, je instaliran filtracijom kroz filtere s različitim veličinama pora, određivanje osjetljivosti na zraku, stabilnost na pH 3,0, je upotreba derivata deoksiuridin suzbijanju umnožavanje virusa samo DNA koja sadrži i na taj način omogućava da se odredi tip nukleinske kiseline virusa se proučava.

No, samo je moguće utvrditi vrstu virusa u serološkim reakcijama s dijagnostičkim serumima. Izbor reakcije ovisi o svojstvima virusa i sposobnostima laboratorija. Tako su virusi hemaglutinacije identificirani u RTGA, PGGAD, drugim virusima u RN, RNGA, RDP, DSC, MFA, ELISA.

Ako su studije provedene na istoj vrsti životinja iz kojih je snimljena biomaterijalna studija i ako su zabilježeni isti klinički znakovi kod zaraženih životinja, to ukazuje na pozitivan rezultat studija. Izolacija virusa na druge živote nije uvijek dokaz etiologije bolesti, osobito ako je virus izoliran iz njihovih dišnih puteva ili crijeva, gdje je često prisutan asimptomatski prijenos virusa. Osim toga, lažni pozitivni rezultati mogu se dobiti u vezi s izolacijom latentnih virusa iz životinja ili iz staničnih kultura. U tim slučajevima, potrebno je dokazati etiološku ulogu izoliranog virusa. Jedna od metoda može biti reprodukcija bolesti u prirodno osjetljivim životinjama. No, osim što je skupo, bolest se ne može reproducirati. Stoga, bez obzira na rezultate ovog područja laboratorijske dijagnoze, studije se provode u trećem smjeru.

U treći smjer laboratorijske dijagnostike nose serološku retrospektivnu dijagnostiku.

Retro (povratak) znači da se provodi dijagnoza prošle bolesti. Ova vrsta dijagnoze uključuje serološke studije krvnog seruma pacijenata i bolesnih životinja zbog prisutnosti antitijela na virus. Treba imati na umu da je pozitivan jedna studija, čak i ako je visok titar antitijela nema dijagnostičku vrijednost. Izuzetak može biti situacija u kojoj se potpuno pojavljuje novi virus na teritoriju. Prisutnost protutijela u krvi može biti posljedica prethodne bolesti, asimptomatske infekcije ili cijepljenja. Pozitivan rezultat takve istrage ukazuje samo na kontakt životinje s virusom, ali ne određuje kada je to bio. Serološki testovi su dijagnostički važni kada se otkrije povećanje titra antitijela na određeni virus. Za to su životinje dva uzorka krvnog seruma, po prvi put u ranoj fazi bolesti, a drugi put u 2- 3 tjedna kad je već nestala kliničke znakove bolesti. U oba seruma, korištenjem seroloških reakcija, određuje se titar antitijela za sumnjivo infektivno sredstvo. Ako je titar antitijela povećava do 4 ili više puta, to je dokaz da je životinja organizam nastavi infektivne bolesti uzrokovane patogenom na koje antitijelo je određena u serumu. Za ove serološke studije najčešće se koriste RN, IFA, RTGA, RNGA. Najpouzdaniji rezultati dobiveni su pH, koji može otkriti neutralizirajućih antitijela koje su odgovorne za zaštitu tijela od virusne infekcije. Unatoč retrospektivnu dijagnozu, ova linija virološkog istraživanja je vrlo značajna, daje ideju o širini širenja zaraze, dinamika njegove manifestacije (povećanje ili smanjenje broja seropozitivnih životinja) i omogućuje vam da poduzmu učinkovite mjere za otklanjanje virusnih infekcija, provoditi specifične i opće veterinarsko-sanitarne mjere, pružanje održive dobrobiti gospodarstva u odnosu na određenu virusnu infekciju.

Serološke metode istraživanja trebaju se široko koristiti za procjenu postvaccinalnog imuniteta. Poznato je da titar postvaccinalnih antitijela i postotak seropozitivnih životinja za praktičnog veterinara služi kao pouzdani vodič pri odlučivanju hoće li se ponovno cijepiti. Tako na farmama peradi u sadašnje vrijeme određuje se vrijeme cijepljenja za ptičju influencu na temelju rezultata sustavnih seroloških istraživanja od 10-15% zaliha. Slične "imunitetne usluge" trebaju biti organizirane za stočarske farme. Takva bi služba ispravno procijenila intenzitet colostralnog i postvaccinalnog imuniteta i planirala vrijeme cijepljenja svih skupina životinja

Retrospektivna identifikacija tipova i varijanti virusa prethodne infekcije nije manje važna za specifičnu prevenciju, a isto tako u ekološkom aspektu omogućuje poznavanje spektra interspecifične cirkulacije određenog virusa.

Dakle, dijagnoza svake virusne infekcije je samo složena, temeljena na epizootskim, kliničkim, pato-anatomskim i posebno laboratorijskim istraživanjima koja su odlučujuća u formulaciji konačne dijagnoze. Da bi se postigao brz i točan rezultat laboratorijskih istraživanja, kombiniraju se nekoliko metoda različitih viroloških smjerova, što omogućuje čvrsto vjerovanje u pouzdanost studija.

Datum dodavanja: 3 | Prikazi: | Kršenje autorskih prava

Načela dijagnostike virusnih bolesti životinja

1) 10. Moderna klasifikacija virusa, kriptograma virusa.

Suvremena klasifikacija virusa je univerzalna za viruse kralježnjaka, beskralješnjaka, biljaka i protozoa. Temelji se na temeljnim svojstvima viriona, čiji kriteriji čine osnovu moderne klasifikacije:

1. tip nukleinske kiseline (RNA ili DNA), njegova struktura;

2. prisutnost lipoproteinskog sloja;

3. strategija virusnog genoma;

4. veličina i morfologija viriona, vrsta simetrije, broj kapsomera;

6.fenomena genetske interakcije;

7. okrugli osjetljivi domaćini;

8. Patogenost, uključujući patološke promjene u stanicama i stvaranje intra-

Na temelju tih svojstava, virusi su podijeljeni u narudžbe, obitelji, podskupine, rodove i vrste. Podjela u obitelji provedena je prema kriterijima navedenim u točkama 1. i 2. podjela na rodove i vrste - na temelju sljedećih svojstava.

Virusni kriptogram je kodirani zapis njihovih svojstava.

Sastoji se od četiri para znakova ili simbola:

-prvi par - vrsta nukleinske kiseline ((R-RNA, D-DNA) i broj lanaca (1,2);

-Druga - molekularne težine nukleinske kiseline (,? milijuna Daltona, ako je fragmentiran, tada pisati token) i postotak svoje težine na molekularnoj težini ukupnog viriona;

-treći par znakova opisuje viriona oblik (izgled), a dobije nukleokapsid (S - sferni, U - izdužene s paralelnim stranama i zaobljenog kraja ili kraja, E - izdužene s paralelnim stranicama, a završava na kvadrat, X - kompleks);

-Četvrti par opisuje tip domaćina (A - aktinomicete, B - bakterije, F - gljive, i - beskralješnjaka, S - sjeme biljke, V - kralježnjaka) i virus tip transporter (O - bez nosača, Ac - grinje, A1 - štitasti moljac, Au - letaka).

Karakteristike obitelji flavivirusa.

Flaviviridae - obitelj virusa prenosi pretežno od artropoda (grinja i komaraca). Obitelj je dobila takvo ime iz virusa žute groznice, (engleski. Virus žute groznice, od lat. flavus - žuta). Žuta groznica, zauzvrat, tzv. Zbog toga što uzrokuje žuticu [2].

Flaviviridae izdvojena je kao zasebna obitelj iz obitelji Togaviridae 1985. godine. Obitelj uključuje sljedeće rodove:

· Flavivirus (karakteristična vrsta - virus žute groznice, virus zapadnoga Nila, virus denga groznice, virus krvarenjača encefalitisa) - uključuje 53 ljudska i životinjska virusa

· Hepacivirus - uključuje virus hepatitisa C i nekoliko životinjskih virusa

· Pegivirus uključuje dvije vrste

· Pestivirus (karakteristična vrsta - virus proljeva goveda, virus klasične groznice ili svinjske kuge) - uključuje 4 virusa koji inficiraju sisavce, ali ne i ljude.

Fenivirusni genom predstavlja nekoliko linearnih jednolančanih (+) - RNA od 9,6 do 12,3 tisuća nukleotida duljine. 5'-kraj sadrži metilirani nukleotid (5'-cap).

Viralne čestice su obložene ljuskom, imaju oblik kugle i promjer od oko 40-60 nm.

Bolesti uzrokovane članovima obitelji:

· Zapadni Nil groznica

Princip, izgled, zasluga i demerita RIF-a i ELISA-e.

Prednosti RIF: visoka specifičnost i osjetljivost; jednostavnost tehnike postavljanja; potreban je minimalni broj komponenata. Ovo je izričita dijagnostička metoda, jer u roku od nekoliko sati možete dobiti odgovor. Nedostaci uključuju subjektivizam u procjenjivanju intenziteta sjaj i, nažalost, ponekad fluorescentni serumi su slabe kvalitete. Trenutno, RIF se široko koristi za dijagnozu virusnih bolesti životinja.

Prednosti ELISA-e: visoka osjetljivost; specifičnost; jednostavnost tehnike postavljanja; potreban je minimalni broj komponenti; nisu potrebni posebni instrumenti; evaluacija se može obaviti vizualno; mogućnost automatizacije, koja mu omogućuje da se koristi za masovno istraživanje; sera pod istragom ne zahtijevaju predobradu. Ovo je izričita dijagnostička metoda, jer u roku od nekoliko sati možete dobiti odgovor.

1) 39. Primarne tripsinizirane, diploidne i transplantable stanične kulture, njihova svojstva i svojstva.

Po prvi puta, kulture su korištene u 50-im godinama. Stanice na karti:

1) PRIMARNI TRIPSINATI. Dobivaju se iz embrionalnog tkiva, majmuna itd. Tk se stavlja u poseban medij za jame, oslobođen od izlijevanja nepotrebnih elektrolita, tla, a zatim izlije r-rum od tripsina u posudi. Stavite na magnetsku miješalicu, posudu se trese. Zatim se provodi centrifugiranje: živi se ł leži, a mrtvi plutaju. Supernatant sa mrtvim se isušuje, sediment se izlije s medijem, potresne i dobije se gusta otopina, a zatim se brojanje broji u Goryaevovoj komori. Suspenzije se stave u separator i dodaju se poseban medij za rast, više od 1 ml medija treba biti  2 milijuna . Spojeni su na površinu stakla, oprani medijem i počinju se množiti, pokrivajući posudu s MONOLITOM. Tada se medij za rast izlučuje i dodaju nosače ( ne umire, ali se ne reproduciraju) i VIRUSI i uzgaja se 3-4 dana.

Ako okolina za dodavanje seruma krvi, u / d sadrži posebnu PETUIN protein koji stimulira proliferaciju (uglavnom španjolski syv goveđih zametaka), te dobiti klicu u srijedu.

Prvenstveno tripsinizirane kulture koriste se samo 1 put.

OSTALO (IMMORTAL) su stanice raka: Hela, Hep-1, Hep-2 - dobivene su u 50-im godinama, pa su se stalno ponovno naseljavale. U tom slučaju, iz stare epruvete izliti medij za medij i dodati VERSENE, pod njegovim utjecajem,  taper off. Suspenzija stanica s ovim in-centrifugama, settles, verten se drenira i dodaje se potporna otopina. Dakle, oni ponovno dobivaju gotovu kulturu.

Virusi u kulturi stanica otkriveni su svojim citopatskim djelovanjem:

1) formiranjem na mediju kontinuiranog (plinovitog) rasta "plakova" bez stanica,

2) na vakuolizaciju stanica kulture

3) pojavnost staničnih inkluzija

Također se koristi elektronska mikroskopija i serološke reakcije

1) 16. Priprema materijala koji sadrži virus za istraživanje.

U laboratoriju se dobiveni patch materijal oslobađa od konzervansa, odmrzava, ispire se od glicerina, odvaže ili izmjeri. Neki od materijala se uzimaju za virološke studije, a ostatak se pohranjuje u hladnjak za dodatne studije. Zatim izrađuju plan za istraživanje poslanih materijala.

Priprema organa i tkiva. Virus se mora otpustiti iz stanica organa i tkiva i prenijeti u fosfatni pufer ili Hanksovu otopinu. Da biste to učinili, materijal je pažljivo uzemljen škarom i tlo u mortu s sterilnim kvarcnim pijeskom. Od mljevenog materijala, 10% suspenzija se općenito pripravlja na fosfatnom puferu ili Hanksovoj otopini. Rezultirajuća suspenzija se centrifugira na min., Supernatant se usisava u sterilne boce i oslobađa od mikroflore. Potrebno je izbjeći nepotrebno velike doze antibiotika, budući da njihov višak nakon daljnjeg unošenja u kulturu stanica može uzrokovati nespecifičnu degeneraciju potonjeg. Poželjnost različitih doza antibiotika i optimalni način centrifugiranja u svakom slučaju navedeni su u uputama za dijagnozu odgovarajućih virusnih bolesti. Izlaganje suspenzije s antibioticima nije niže na sobnoj temperaturi, tada se materijal podvrgava bakterijskoj kontroli za prisutnost bakterija, gljivica inokulacijom s MPA, MPB, MPBB i Saburo medijem. Nakon dobivanja negativnog rezultata bakteriološke kontrole, materijal koji sadrži virus koristi se za inficiranje laboratorijskih životinja, pilića zametaka ili staničnih kultura. U slučaju pozitivne bakteriološke kontrole, suspenzija virusa podvrgava se dodatnom liječenju s antibioticima i ponovno stavlja kontrolu. Suspenzija je pohranjena na -20 ° C - minus 70 ° C

Priprema iscjedka iz nosa, očiju. Tamponi uronjeni u odgovarajuće otopine, tresti, pažljivo stisnuti, dobivena tekućina se centrifugira 20 minuta na 2-3 tisuće minuta. Supernatant se aspirira u sterilnu epruvetu i dodaju se penicilin i streptomicin POED. po 1 ml, održavana i nakon bakteriološke kontrole koja se koristi za infekciju. Iz staničnog taloga, preparati se pripravljaju za RIF.

Priprava izmeta. Stolica Uzorak (približno 1 g) se stavi u posudu s kuglicama koje sadrže 10 mL je Hankova otopina ili otopina fosfatnog pufera. Nakon gemogenizatsii materijala vrtloženjem i zatim centrifugira na 2-3 tisuća. Min tijekom 30 minuta, supernatant usisan, dodan penicilin, streptomicin prehrane. / ML, 30 jedinica nistatin. / Ml tetraciklina i 200 ug po 1 ml. Nakon minutu kontakta, usjev se sterilizira, smrzava i čuva na minus 10 ° C - minus 20 ° C. Na dan infekcije ispitnog materijala otopljeni i ponovno centrifugira kako bi se uklonili novoosnovani nakon zamrzavanja sediment. Neiskorišteni materijal pohranjen je zamrznut do kraja ispitivanja. Fekalna mogu se zamijeniti rektalni brisevi, koja zahtijeva manje vremena za obradu, a učestalost izolacije virusa ne samo manje, ali ponekad više nego za fekalne studija. Urin se tretira s antibioticima (ED / ml) i koristi se za infekciju. Sadržaj papula, vezikula i pustula, ljestvica i korica ispituje se osipom kože. Sadržaj papule i vezikule se razrijedi s otopinom soli 1: 5, i kore, pahuljica poslije trituriranja suspendiran u fiziološkoj otopini 1: 5-1: 10, i centrifugira na 2-3 tisuća min.. techeniemin Nakon tretmana s penicilinom i streptomicinom (ED / ml), materijal se koristi za infekciju.

Priprema krvi. Da biste izolirali virus, može se upotrijebiti cijela defibrinirana krv ili "lakewood" krv ili krv antikoagulansom. U potonjem slučaju, uzmite 5 ml krvi u epruveti s 5-6 kapi heparina i zamrznite. Nakon odmrzavanja, hemolizirana krv centrifugira se 2-3,000 minuta 15 minuta, dodaju se penicilin i streptomicin brzinom od ED / ml i nakon što se sterilna ispitivanja koriste za infekciju. U ove svrhe prikladna je i koagulirana krv. Temelji se u malteru i dodana je mala količina Hankove otopine (1: 1 ili 1: 2).

2) 64. Titar virusa. Jedinične količine virusa (ooe, pfu, Gai, LD50 ELD50, ID50, EID50, TSPD50) \ titar virusa. - Ova količina virusa sadržana u jediničnom volumenu materijala. Budući da je količina virusa ne može izraziti u uobičajeno korištenom (volumen, težinu i tako dalje. N.) jedinica, naselje na mjerenje u jedinicama radnjom ili zahvatom jedinica. Virusi imaju zarazni i hemaglutinacijski učinak. Stoga su jedinice broja virusa zarazne i hemaglutinirane. LD50 je doza virusa koja ubija 50% laboratorijskih životinja (tipično bijeli miševi), ID50-doza virusa koji uzrokuje da se klinički simptomi ili patoloških promjena u 50% inficiranih laboratorijskih životinja, polju - doza virusa koja ubija 50% pilećeg embrija; EID50 -Dose virus uzrokuje patološke promjene u 50% inficiranih pilećih embrija; TSPD50- doza virusa koja uzrokuje citopatogeni učinak u 50% inficiranih staničnih kultura (obično cijevi s kulturama stanica). Broj ED50 (LD50 ID ELD50 ili TSPD50 EID50) virus sadržan u jedinici volumena materijala koji sadrže virus, te će biti ekspresije titar (T) virusa u ovom materijalu. Na primjer, T = 103,48 TSPD50 / 0,1 ml znači da je svaki od 0.1 ml koja sadrži materijal virusa sadržan 103'48 virus doze (m, E. više od 1000, a manje od, odnosno 103.48 = 3020) svaki od kojih je u mogućnosti da uzrokuju citopatogeni učinak u 50% epruvetama s kulturom stanica. poznate metode za određivanje količine virusa u materijalu od lokalnog oštećenja u inficiranim staničnim kulturama i Chorio-alantoičke ljuska (Hao) pilećih embrija u kojem je količina virusa u obzir u pfu jedinice (PFU), jedinice spajanja (OOE). Međutim, korištenje metoda je teško zbog činjenice da pri visokim koncentracijama virusa u materijalu je nemoguće izbjeći fuzijskih plakove i nemoguće je kvantificirati, odnosno [4]. Metoda se izvodi živim virusom, radno intenzivna i dugotrajan u izvršenju (72-96 sati).

Konjske gripe ili influenca, - akutne virusne vrlo zarazna bolest koja se manifestira depresija, hipertermija (groznica), suzenje, kašalj, hiperemiju i edem sluznice očiju, nosa i dušnik. Bolesni konji svi vozrastov.Vozbuditel bolesti - virusi iz obitelji ortomiksovirus vrste gripe. Utvrđeno je da se prirodno javlja virusi razmjene između čovjeka i konja, a virus konj gripe je u stanju prevladati barijeru i uzrokovati ljudskih infekcije. Međutim, manifestacija konjske gripe kod ljudi varira od asimptomatskih do klinički slabih. Tu je i odnos između virusa influence konja i neke vrste virusa gripe ptits.Osnovnoy izvor zaraze patogena - bolesnih ili bolesne životinje. Virus se izlučuje u vanjskom okruženju s nosnom tajnom zaraženih osoba tijekom kašlja. Neizravni prijenos mikroba s hranom, vodom i polaznicima je također moguć. Brzo širenje virusa u stadu olakšan neimmunnizirovan-vladinog loshadey.Inkubatsionny razdoblje od bolesti je 5-7 dana. Gripa se iznenada manifestira. Životinje stoje bespomoćno u stajama, u većini slučajeva odbacuju hranu, a kosa je razbarušena. Zatim, tjelesna temperatura raste do 40-41 ° C i može se čuvati nekoliko dana, tu je nepredvidiva, česta kašalj (promatrano u roku od 2-10 dana), valjanje u suho, oštro, često i bolno. Pacijenti konji nosne sluznice cigla-crvena boja, jasno iscjedak iz nosa i glaz.Perebolevshie životinje steći imunitet na reinfekcije s istim tipom virusa od najmanje godinu dana. Ždrebad može cijepiti pasivnog imuniteta od materey.Diagnoz temelji na klinički i laboratorijski podaci epizootologicheskih krovi.Lechenie studija na postupke inhalira s terpentin, 2% otopinom natrijevog bikarbonata, i ostale bikarbonata. Upotrebu komplikaciju sulfonamida, antibiotici (npr, benzilpenicilin prehrane u 5 ml 0,5% -tne otopine novokain, 2 puta dnevno), kemoterapija (amantadin i njegovih derivata) i za simptomatsko liječenje. Preporučena autohaemotherapy (uvođenje vlastita krv) subkutano sa 60 ml krvi, ponavlja 2-3 dana s povećanjem doza 20 influence ml.Profilaktika konja je stvoriti optimalne uvjete i hranjenja, karantene Pridošlice pojedinaca daju inaktivirani formolvaktsin (imunosti od njih ne prelazi 4-6 mjeseci). Bolesni konji su izolirani, oslobođeni od posla i treninga, s lako probavljivom hranom i toplom vodom. Životinje se postupno uključe u rad. Patogeneza. Konji imaju konstruktivne značajke koje djelomično određuju prirodu lezija u virusnim respiratornim bolestima. Virusi influence imaju izraženu tropizam epitela dišnih puteva, cilindričnim epitelom stanica posebno donje školjke i dušnika. ih prodrla, virus počne ubrzano razmnožavaju, što uzrokuje degeneraciju, nekroze, epitela ljuštenja kože. Oštećena sluznica postaje propusna za viruse, uključeno je temeljno tkivo s vaskularnom mrežom. Kao rezultat razaranja stanica nastaju reaktivni upali, koji međutim ne sprečavaju daljnje napredovanje infekcije. Postupak se proteže na niže dijelove dišnog sustava: bronhitis, razvijaju erozivne peribronhit, periarteritis, bronhopneumonija. Može biti lezija i drugi organi - miokarditis, encefalopatija. Iako su virusi gripe vrlo brzo uništen u tijelu, oni su otrovne tvari, stanični ostaci, bakterije, jure u krvotok, što je rezultiralo mogućeg zagušenja, zastoj, krvarenja. Značajni poremećaji koagulacije i fibrinolitički sustavi pogoršavaju razvoj hemoragijskog sindroma. Sinergizam ovih procesa i povećava proteolitičku citotoksičku aktivnost virusa, razgradnje postkapilarnim zidovi generalizacija infekcije, upale pluća razvoj drenažu s plućnog edema. Hvatanje virusa iz stanice utječe na nova područja epitela iu patološkog procesa koji su uključeni veliku površinu sluznice. S slabom rezistencijom makroorganizma nastaje sekundarna infekcija koja uključuje različite bakterije. Zbog opijenosti može doći do smrti fetusa u ženama. Kao odgovor na širenje virusa gripe ima određene imunološke reakcije u tijelu, proizvedene od strane lokalnih antitijela na virus, koji igraju vodeću ulogu u zaštiti tijela od infekcije influencom.

1) 40. Metoda priprave kulture stanica fibroblasta zametaka pilića.

Stanične kulture mogu se dobiti ne samo iz organa embrija, ali i tijela različitih mladih zaklanih životinja, ali adaptacija embrionalnih stanica na umjetnim podlogama, stopa reprodukcije i njihova osjetljivost na različite viruse značajno je veća nego kod stanica dobivenih iz tijela mladih i odraslih životinja,

Često u veterinarskoj praksi koriste se 9-10 dana starih zametaka pilića (CE), zametaka zečeva, miševa, zamoraca, različitih poljoprivrednih i domaćih životinja za pripremu CC. U medicinskoj virologiji najčešće se koriste razne transfektirane stanične linije i stanične kulture iz ljudskih embrijskih fibroblasta. Ovaj materijal je vrlo jeftin, sterilan i uvijek je u dovoljnoj količini dostupan u ginekološkim odjelima rodilišta, nakon prestanka trudnoće kod žena.

Otkriće in vitro uzgoj životinjskih stanica metodom prethodila je mnogo godina istraživanja i razvoja medija za kulturu za proizvodnju low-cost recept laboratorijskog modela za uzgoj virusa koji bi mogao zamijeniti CE, laboratorijskih i domaćih životinja. Prioritet u ovom pitanju pripada američkim znanstvenicima. 1943 godu Herang u 1949 godu Endres proučavali faze degeneracije stanica virusom, a potom se zove citopatogeni učinak (CPE). Žive i mrtve stanice su jasno vidljive u konvencionalnom svjetlosnom mikroskopu čak i kod niskog povećanja. Godine 1952., američki znanstvenici Dulbecco i Vogt razvio metodu za dobivanje primarne kulture tripsiniziranih stanica, što je odmah primila široka praktičnu primjenu medicinske i veterinarske virologiju laboratorija Biokombinat, biofactories i drugih institucija.

Stanične kulture se koriste za:

1. Detekcija virusa u ispitivanom patološkom materijalu na CPD-u.

2. Identifikacija virusa, detekcija specifičnih antitijela u ispitivanjima krvnih seruma i određivanje njihovih titara iz reakcije neutralizacije na CC.

3. Akumulacija virusa za proizvodnju žive kulture i ubijena virusna cjepiva.

4. Dobivanje viralnih antigena - dijagnostici za serološku dijagnostiku virusa

1) 31. Neispravne čestice koje ometaju, mehanizam stvaranja, svojstva, značenje.

Sposobnost interferencije je da su oštećeni u ometaju čestice spriječiti širenje zaraznih homologne virus, koji im je pomagač virusa. DI čestice koriste za njihovu reprodukciju proizvode gena zaraznog virusa i time specifično inhibiraju njegovu reprodukciju. Sposobnost CI-čestica na self-obogaćenja je posebno vidljivo u serijskom pasaže virusa na visokoj mnogostrukosti infekcije. Primjenom nerazrijeđenog virusnog cjepiva u serijskim pasažama in vivo ili in vitro, najbolji način za akumulaciju DI čestica, te primjenom razrijeđene inokuluma smanjiti njihove koncentracije na minimalnu razinu, a utječe na prinos infektivnih virusayuDefektnye interferirajućih čestice nalaze u skoro svim životinja viruse (osim pox virusi), Treba napomenuti da je automatsko uplitanje uzrokovano DI česticama u pikornavirusima slabo izraženo. Interferencija sposobnosti DI čestica može ovisiti o vrsti staničnih kultura. DI čestice igraju ulogu u infekciji i imunosti. Mogu oslabiti prirodni virusnih infekcija, kao rezultat interferencije s infektivnim virusom homologne i utjecati na uspostavu i održavanje perzistentne infekcije in vivo i in vitro. Visoki sadržaj DI čestica u živim cjepivima može utjecati na njihovu učinkovitost.

1) 32. Stanična reakcija na virusnu infekciju.

Infekcija stanica s virusima započinje adsorpcijom virusa na staničnoj membrani koja se javlja uslijed interakcije površinskih proteina virusa s membranskim receptorima stanice. Različiti virusi koriste različite stanične receptore da se vežu na staničnu membranu. Temperatura, u pravilu, ima malo utjecaja na adsorpciju virusa (pri 4 ° C i pri 37 ° C brzina ovog postupka je gotovo jednaka). Vezanje virusa na membranske receptore ne štiti virus od neutralizacije s protutijelima.

Adsorbirani virusi ulaze u stanicu s endocitozom ili fuzije sa staničnom membranom. Jednom u citoplazmi, virusi se otpuštaju iz većine bjelančevina (uklanjanje virusa) i započeti repliciranje. Penetracija u stanicu, uklanjanje i reprodukcija virusa ovisi o jačini energetskog metabolizma stanice i biokemijskim promjenama koje se javljaju u staničnoj membrani i citoskeletu. Dakle, pri temperaturama ispod 37 ° C prodiranje virusa u stanicu usporava.

Uobičajeno je da faktor okidača virusa ulazi u stanicu vezanje nekih površinskih proteina virusa na membranske receptore stanice. Ovi proteini su zastupljeni na površini virusa za najmanje nekoliko molekula, a broj membranskih receptora obično doseže nekoliko stotina.

Na točki kontakta virusa sa staničnom membranom, postoji agregacija receptora, koja aktivira mehanizam intracelularnog prijenosa signala i stimulira promjene u staničnoj membrani. Stanica adsorpcije obično percipira kao vezu "normalnog" liganda na odgovarajući receptor.

Apsorpcija mnogih virusa aktivira endocitozu, koja počinje formiranjem na membrani graničnih jama prekrivenih klathrinom. Tada nastaju endosomi, u kojima virusi ulaze u citoplazmu. Ova metoda penetracije u stanicu je tipična za pikornaviruse, viruse influence i adenoviruse. Naknadna fuzija virusa s endosomskom membranom stimulirana je smanjenjem pH u endosomu.

Učinak pH na penetracijski proces je dobro proučen u virusu influence. Kod adsorpcije ovih virusa, agregacije receptora i endocitoze, važnu ulogu imaju hemaglutinini vanjske ljuske. Konformacijske promjene u hemaglutinina koji nastaju pri niskom pH u endozomu, na izlazni vodi na površini područja amfifilnih molekula, što rezultira fuzija virusnih i endozomnim membranama.

Na molekularnoj razini, procesi spajanja s membranom i odstranjivanje većine virusa slabo se shvaćaju. Kao rezultat fuzije, lipidi i proteini vanjske ovojnice virusa se miješaju s lipidima i proteinima stanične membrane, a nukleokapsid virusa pojavljuje se u citoplazmi.

Kompleksni virusi u adsorpciji i spajanju sa staničnom membranom mogu dosljedno uključivati ​​različite proteine ​​vanjske virusne omotnice. Postoje podaci da mehanizmi adsorpcije virusa i njihovo prodiranje u stanicu nisu isti u različitim tkivima ili na različitim površinama epitelnih stanica.

1) 34.Kultiviranje virusa u tijelu životinja. gnotobioti, gnotopori. Linearni, spf životinje.

Za uzgoj virusa se koriste stanične kulture, piletine i osjetljive laboratorijske životinje. Ove iste metode se također koriste za uzgoj rickettsia i klamidija - obvezuju intracelularne bakterije, koje ne rastu na umjetnim hranjivim medijima.

Stanične kulture se priređuju iz životinjskog ili ljudskog tkiva. Kulture su podijeljene na primarne (ne transplantable), polu-transponirane i transplantable.

Priprema primarne kulture stanica Sastavljen je od nekoliko uzastopnih faza: usitnjavanje tkiva, separacijom tripsinizacijom stanica, pranje rezultat homogena suspenzija stanica izoliranih iz tripsina, a zatim se suspendiranjem stanica u hranjivom mediju osigurava njihov rast, kao što je 199, uz dodatak sredstva za goveđeg seruma.

Transplantirane kulture za razliku od primarnih, prilagođeni su uvjetima koji osiguravaju njihovo trajno postojanje in vitro i traju nekoliko desetaka prolaza.

Transplantirani jednoslojne kulture stanica dobiva iz normalnih i malignih staničnih linija sa sposobnošću trajno proliferacije in vitro na određenim uvjetima. Oni uključuju stanice karcinoma, izvorno izolirana HeLa od karcinoma cerviksa, HEp-3 (karcinom iz limfoidnih stanica) i na normalne stanice humanog amnionskog bubrega majmuna, i drugi.

Za polu-transplantacijske kulture uključuju diploidne stanice ljudi. Oni predstavljaju stanični sustav koji u procesu od 50 prolaza (do godine dana) čuva diploidni skup kromosoma, tipičan za somatske stanice tkiva. Ljudske diploidne stanice ne podliježu malignoj degeneraciji i stoga se povoljno razlikuju od tumorskih stanica.

Na reprodukciju virusa u staničnoj kulturi (CPD), koji se mogu detektirati mikroskopski i karakterizirani morfološkim promjenama u stanicama.

Priroda CPD virusa koristi se i za njihovu detekciju (indikaciju) i za indikativnu identifikaciju, tj. Za određivanje identiteta njihovih vrsta.

Jedna od metoda indikacija virusa temelji se na sposobnosti površine stanica u kojima se reproduciraju, apsorbiraju crvene krvne stanice - reakciju hemadsorpcije. Da se stavi u kulturu stanica inficiranih virusima, dodajte suspenziju eritrocita i nakon nekog vremena kontakta stanice se isperu s izotoničnom otopinom natrijevog klorida. Stained crvene krvne stanice ostaju na površini stanica inficiranih virusom.

Druga metoda je reakcija hemaglutinacije (RG). Upotrebljava se za otkrivanje virusa u tekućoj kulturi kulture stanica ili korionelanta ili amnionske tekućine u zametku embrija.

Broj čestica virusa određen je titriranjem prema CPD u kulturi stanica. Da bi to postigli, stanice kulture su zaražene deseterostrukim razrjeđivanjem virusa. Nakon 6-7 dana inkubacije, oni se ispituju zbog prisutnosti CPD-a. Najveće razrjeđenje se uzima za titar virusa, što uzrokuje CPD u 50% zaraženih kultura. Titar virusa izražava se brojem citopatskih doza.

Preciznija kvantitativna metoda računanja pojedinih čestica virusa je metoda plaka.

Neki virusi mogu se otkriti i identificirati uključivanjem, koje formiraju u jezgri ili citoplazmi zaraženih stanica.

Pileći embriji embriony.Kurinye odnosu na staničnim kulturama su mnogo manje zagađena virusa i mikoplazmi, a također imaju relativno visoku vitalnost i otpornost na različite utjecaje.

8-12 dana pilića zametaka koriste se za dobivanje čistih kultura rickettsia, klamidija i brojnih virusa za dijagnostičke svrhe, kao i za pripremu raznih lijekova (cjepiva, dijagnostika). Množenje tih mikroorganizama prosuđuje se morfološkim promjenama otkrivenim nakon otvaranja embrija na njegovim membranama.

O reprodukciji nekih virusa, primjerice gripe, boginja, može se procijeniti reakcija hemaglutinacije (RGA) s pilulom ili drugim eritrocitima.

Nedostaci ove tehnike uključuju nesposobnost da otkrije test mikroorganizma bez prethodne disekcija embrija, a prisutnost velikog broja proteina i drugih spojeva koji ometaju kasnije rikecije pročišćavanje ili virusa u proizvodnji različitih pripravaka.

Laboratorijske životinje Specifična osjetljivost životinja na određeni virus i njihova dob određuju reproduktivni kapacitet virusa. U mnogim slučajevima, samo novorođenčad je osjetljiva na određeni virus.

2) 59. klase limfocita, njihovu diferencijaciju u T i B limfocita kletki.Klassy. U 60 godina, uvedene su dvije glavne klase limfocita: T-stanice koje se razvijaju u timusu, su odgovorni za letochny imunitet i B-stanice, koje se razvijaju neovisno o timusu, su odgovorni za neke od antiteloproduktsiyu.Odnako T stanice imaju važnu ulogu u regulaciji imunitet i djeluju kao suradnici B stanica u humoralnom otveta.T limfocita proizlaze iz prekursorske stanice, raspršivanje iz koštane srži u timus.

Nakon završetka diferencijacije, T-limfociti migriraju u limfne čvorove i slezenu, gdje se razmnožavaju pod utjecajem antigena. Neprekidno cirkuliraju krvlju i limfom, prodirući gotovo sva tkiva u tijelu. T-limfociti, koji reagiraju na antigen, počinju transformirati u blast stanice i klonalno se razmnožiti. U ovom su slučaju jasno izražene imunološke funkcije. U skladu s funkcionalnim svojstvima, T stanice su podijeljene u četiri kategorije:

1. T-stanice-pomoćnici izvode određenu imunološku funkciju u razvoju imunosti gama na bazi suradnje s B-limfocitima. Takva interakcija stanica potiče reprodukciju klon B limfocita i intenzivnu produkciju protutijela.

2. T limfociti igraju ulogu imunoregulatorsko, jer oni mogu pojačati ili suprimira imunološki odgovor specifičnim subpopulacijama T-stanica (supresorskih T-stanica), prebacivanje sinteze imunoglobulina.

3. Stanice T-ubojica imaju sposobnost da ubiju ciljne stanice, stranu tijelu protiv koje su prethodno senzibilizirane. Ciljane stanice imaju antigene koje prepoznaju T-stanice.

4. T-stanice koje proizvode posrednike staničnog imuniteta koji nastaju nakon izlaganja antigenima. Povećanje apsorpcije aktivnost makrofaga, oslobađanje tvari koje potiču imobilizacija makrofagov.U embrije ljudi i drugih sisavaca B limfocite dobivene u jetri i koštane srži iz matičnih stanica, i odraslih sisavaca - samo u koštanoj srži. Diferencijacija B-stanica odvija se u nekoliko faza, od kojih je svaka karakterizira prisutnost određenih proteinskih markera i genetskih gena prilagodbe stupanj immunoglobulinov.B limfociti potječu iz pluripotentne matične stanice također dovesti do svih krvnih stanica. Matične stanice se nalaze u određenom mikro okolini, što osigurava njihov opstanak, self-obnova ili, ako je primjereno, diferencijaciju. Mikrookolina određuje koji put prolazi razvoj matičnih stanica (eritroidne, mijeloidne ili limfoidne) [1].Differentsirovka B-limfocita je podijeljena u dva dijela - koji antigennezavisimuyu (preuredi imunoglobulinske gene i njihovu ekspresiju) i antigen (pri kojem se aktivacija, proliferacija i diferencijacija u plazma stanice). Su sljedeći intermedijeri oblici dospijevaju B limfocita: B-stanice začetnih stanica - ne sintetiziraju teški i lagani lanci imunoglobulina sadrže

embrionalnih IgH i IgL gena, ali sadrže antigenski marker koji je zajednički sa zrelim pre-B stanicama.

Rane pro-B stanice su D-J preraspodjela u IgH gama.

Kasne pro-B stanice - V-DJ preraspodjela u IgH genima.

Velike pre-B stanice - IgH geni VDJ-preraspodijeljeni; U citoplazmi postoje teški lanci klase

eksprimira se receptor pre-B stanica.

Male pre-B stanice - V-J preraspodjela u IgL genima; U citoplazmi postoje teški lanci klase ?.

Male nezrele stanice - B-Igl VJ geni preuređen; sintetizirati teške i lake lance; izražen na membranu imunoglobulina (B-stanični receptor).Zrelye B stanica - gornji IgD.V stanične fuzije dolaze iz koštane srži u sekundarne limfoidne organe (slezena i limfnim čvorovima), gdje su i dalje sazrijevanja, prezentaciju antigen, proliferacija i diferencijacija u stanicama plazme i B stanicama pamćenja.

1) 36. Kultura tkiva u virologiji, klasifikacija, principi dobivanja kulture tkiva.

Kultura tkiva, metoda izlučivanja iz tijela u umjetno stvorenim stanicama, tkivima ili organima. u kulturama tkiva i organa (organi embrija) održavaju svoju održivost ili rast i istodobno održavaju diferencijaciju tkiva, strukture i funkcije organa. Izolirani komad tkiva ili organa koji se koristi za uzgoj izvan tijela, nazvan. cksplant. Kultura stanica raste izvan tijela bez stvaranja tkiva.

Transverzalni profili nasipa i obale: U urbanim područjima, zaštita obala je dizajnirana uzimajući u obzir tehničke i ekonomske zahtjeve, ali je posebna važnost vezana za estetiku.

Mehanička zadržavanja zemljanih masa: mehanička zadržavanja zemljanih masa na padini osiguravaju kontraverzna konstrukcija raznih struktura.

Organizacija ispuštanja površinskih voda: Najveća količina vlage na globusu isparava s površine mora i oceana (88 ‰).

© cyberpedia.suNe autoru materijala. Ekskluzivno pravo je rezervirano za autora teksta.

Ako ne želite da ovaj materijal bude na našoj web-lokaciji, slijedite vezu: kršenje autorskih prava